Question

14．如圖所示為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法示意圖．請(qǐng)回答下列問題：

（1）T-DNA又稱可轉(zhuǎn)移DNA．若質(zhì)粒DNA分子的切割末端為，則與之連接的目的基因切割末端應(yīng)為．
（2）圖中②過程用到的工具酶是限制酶和DNA連接酶，該過程是基因工程最核心的步驟，即基因表達(dá)載體的構(gòu)建．將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)移到農(nóng)桿菌時(shí)，需使用氯化鈣溶液處理該細(xì)菌，處理的目的是使該細(xì)菌處于感受態(tài)．
（3）取被浸染植株的部分組織細(xì)胞接種在固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過脫分化形成愈傷組織后，通過再分化產(chǎn)生不定芽長出試管苗．
（4）檢測基因工程是否成功，首先檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因，這是目的基因能否在真核細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵；其次，利用分子雜交法檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA；最后，利用抗原-抗體雜交法檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）T-DNA又稱可轉(zhuǎn)移DNA．若質(zhì)粒DNA分子的切割末端為，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，目的基因的切割末端應(yīng)為．
（2）圖中②為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，該過程首先要用同種限制酶切割外源DNA分子和運(yùn)載體，其次用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA分子．基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用氯化鈣溶液處理該細(xì)菌，處理的目的是使該細(xì)菌處于感受態(tài)．
（3）植物組織培養(yǎng)過程：外植體$\stackrel{脫分化}{→}$愈傷組織$\stackrel{再分化}{→}$試管苗．
（4）檢測基因工程是否成功，首先檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因，這是目的基因能否在真核細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵；其次，利用分子雜交法檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA；最后，利用抗原-抗體雜交法檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)．
故答案為：
（1）可轉(zhuǎn)移DNA     
（2）限制酶和DNA連接酶         基因表達(dá)載體的構(gòu)建      感受
（3）脫分化      愈傷組織
（4）轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因       分子雜交     抗原-抗體雜交

點(diǎn)評(píng) 本題考查結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的概念、原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．