Question

17．埃博拉病毒（EBOV）是一種能引起人類和靈長類動物發(fā)生埃博拉出血熱（EBHF）的烈性病毒，利用相應(yīng)的生物學(xué)技術(shù)制備出抗EBOV的單克隆抗體，可快速檢測EBOV．請回答下列問題：
（1）方法一：給小鼠注射純化的EBOV蛋白，一段時(shí)間后，從小鼠的脾臟中獲取漿細(xì)胞，將獲得的漿細(xì)胞與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，再經(jīng)過至少兩次篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞．
（2）方法二：科學(xué)家從細(xì)胞中分離出無限增殖基因（prG），可將prG基因?qū)�入能產(chǎn)生抗EBOV抗體的小鼠漿細(xì)胞中，導(dǎo)入prG基因的漿細(xì)胞具有既能無限增殖，又能產(chǎn)生抗EBOV的（特異性或?qū)Ｒ恍曰蛩�需的）抗體的特點(diǎn)．
（3）以上兩種方法獲得的雜交瘤細(xì)胞或帶有prG基因的漿細(xì)胞，可在無菌、無毒的環(huán)境、營養(yǎng)、適宜的溫度和pH和一定的氣體環(huán)境等條件下進(jìn)行體外培養(yǎng)，以便源源不斷的產(chǎn)生抗EBOV的單克隆抗體．
（4）方法二中，若用PCR擴(kuò)增方法獲取目的基因，則需要用到耐高溫的DNA聚合（或“Taq”）酶，該方法能夠成功獲取目的基因的前提是要有一段已知的目的基因核苷酸序列，以便合成引物．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．

解答 解：（1）制備單克隆抗體時(shí)，首先給小鼠注射抗原，然后從小鼠的脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B細(xì)胞，然后與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，再經(jīng)過至少兩次篩選（第一次是用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選是用抗體陽性檢測法篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞）、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞．
（2）漿細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，但不能無限增殖，prG基因使細(xì)胞無限增殖，因此導(dǎo)入prG基因的漿細(xì)胞具有的特點(diǎn)是既能無限增殖，又能產(chǎn)生抗EBOV的（特異性或?qū)Ｒ恍曰蛩�需的）抗體．
（3）動物細(xì)胞培養(yǎng)需要的條件為：無菌、無毒的環(huán)境、營養(yǎng)、適宜的溫度和pH和一定的氣體環(huán)境等．
（4）PCR技術(shù)是在較高溫度條件下進(jìn)行的，因此該過程需要用到耐高溫的DNA聚合（或“Taq”）酶；該方法能夠成功獲取目的基因的前提是要有一段已知的目的基因核苷酸序列，以便合成引物．
故答案為：
（1）脾臟      骨髓瘤     篩選
（2）既能無限增殖，又能產(chǎn)生抗EBOV的（特異性或?qū)Ｒ恍曰蛩�需的）抗體
（3）無菌、無毒      溫度和pH
（4）耐高溫的DNA聚合（或“Taq”）        一段已知的目的基因核苷酸序列    引物

點(diǎn)評 本題考查基因工程、單克隆抗體的制備等知識，要求考生識記基因的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識記單克隆抗體的制備過程，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．