Question

14．下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圈l、圈2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點．請回答下列問題．

限制酶	BamH I	Hind III	EooR I	Sma I
識別序列及切割位點

（1）一個圖1所示質粒分子經SmaⅠ切割后，含有2個游離的磷酸基團．用圖中的質粒和外源DNA構建重組質粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是破壞標記基因和目的基因．
（2）可以選用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時處理質粒、外源DNA，與只使用EcoR I相比較，選用兩種酶切割的優(yōu)點在于可以防止質粒和目的基因切割后自身環(huán)化．
（3）為了獲取重組質粒，將切割后的質粒與目的基因片段混合，并加入DNA連接酶酶，兩種基因能拼接到一起的原因是基因的組成成分和結構相似．
（4）從cDNA文庫中分離獲取目的基因，可以用PCR技術擴增，其中要用到Taq酶或熱穩(wěn)定DNA聚合酶酶．
（5）如果培育出抗蟲的植株，從個體水平角度，可以用進行抗蟲實驗方法檢測．

Answer 1

分析 分析圖1：外源DNA上含有BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四種限制酶的識別序列和切割位點，其中SmaⅠ的切割序列位于目的基因上．
分析圖2：質粒上BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四種限制酶的識別序列和切割位點，其中SmaⅠ的切割位點位于抗生素抗性基因上．

解答 解：（1）質粒經過切割后會形成鏈狀DNA分子，而每一條鏈狀DNA分子都含有2個游離的磷酸基團．用SmaⅠ酶切割外源DNA和質粒時，會導致目的基因與抗性基因被破壞，因此不能用SmaⅠ構建重組質粒．
（2）BamHⅠ和HinRⅢ兩種限制酶切割產生的黏性末端不同，若用這兩種限制酶同時處理外源DNA和質粒，再用DNA連接酶連接兩者時，可避免切割的外源DNA、質粒的自身環(huán)化．
（3）將切割后的質粒與目的基因片段混合，并加入DNA連接酶．不同生物的DNA具有相同的化學組成和結構，因此能連接在一起．
（4）從cDNA文庫中分離獲取目的基因，可以用PCR技術擴增，其中要用到Taq酶或熱穩(wěn)定DNA聚合酶．
（5）如果培育出抗蟲的植株，從個體水平角度，可以用進行抗蟲實驗方法檢測．
故答案為：
（1）2個    破壞標記基因和目的基因
（2）BamHⅠ和HindⅢ（或EcoRⅠ和HindⅢ）質粒和目的基因切割后自身環(huán)化
（3）DNA連接酶     基因的組成成分和結構相似
（4）PCR      Taq酶或熱穩(wěn)定DNA聚合酶
（5）進行抗蟲實驗

點評 本題結合基因結構圖和運載體結構圖，考查基因工程的技術和原理，重點是限制酶和DNA連接酶，要求考生認真分析圖1和圖2，能根據(jù)圖中和表中信息選擇合適的限制酶，準確判斷使用DNA連接酶連接的結果，再運用所學的知識答題．