Question

5．如圖為單克隆抗體制備流程示意圖．

（1）單克隆抗體制備技術(shù)的基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)．
（2）細(xì)胞融合是隨機(jī)的過(guò)程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是篩選雜交瘤細(xì)胞．
（3）為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細(xì)胞稀釋到7～10個(gè)細(xì)胞/ml，每孔滴入0.1ml細(xì)胞稀釋液，其目的是使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的（或單一細(xì)胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）．
（4）若用¹⁵N標(biāo)記的氨基酸培養(yǎng)能產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞，放射性物質(zhì)在細(xì)胞結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)的先后順序是核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、細(xì)胞膜．
（5）單克隆抗體的化學(xué)本質(zhì)蛋白質(zhì)，產(chǎn)生細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞．
（6）第二次篩選的方法抗體檢測(cè)，篩選的目的篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞．

Answer 1

分析 1、據(jù)圖分析，將特定的抗原注射小鼠，篩選出產(chǎn)生抗體的淋巴細(xì)胞；與骨髓瘤細(xì)胞融合，轉(zhuǎn)移到HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，未融合的細(xì)胞死亡，而雜交瘤細(xì)胞存活；雜交瘤細(xì)胞分開(kāi)培養(yǎng)，選育出產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞．
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．
3、兩次篩選：①篩選得到雜交瘤細(xì)胞（去掉未雜交的細(xì)胞以及自身融合的細(xì)胞）；②篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群．

解答 解：（1）單克隆抗體制備的技術(shù)涉及動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)．
（2）據(jù)圖分析，骨髓瘤細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基上無(wú)法生長(zhǎng)，所以骨髓瘤細(xì)胞之間形成的融合細(xì)胞也不能在該培養(yǎng)基上存活；淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞自身融合的細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基上正常生活，但不能增殖，所以經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，HAT培養(yǎng)基上沒(méi)有淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞自身融合的細(xì)胞；骨髓瘤細(xì)胞與淋巴細(xì)胞之間形成的雜交瘤細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基上正常生活，并無(wú)限增殖．
（3）為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細(xì)胞稀釋到7～10個(gè)細(xì)胞/mL，每孔滴入0.1mL細(xì)胞稀釋液，其目的是使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的（或單一細(xì)胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）．
（4）若用¹⁵N標(biāo)記的氨基酸培養(yǎng)能產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞，單克隆抗體是分泌蛋白質(zhì)，首先在核糖體中合成，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上初步加工，之后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)邊緣以“出芽”形式冒出囊泡，囊泡離開(kāi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，轉(zhuǎn)移到高爾基體上，與高爾基體膜融合，囊泡中的物質(zhì)也進(jìn)入到高爾基體中，在高爾基體中進(jìn)一步加工成成熟的蛋白質(zhì)，高爾基體膜也突起形成小泡，小泡離開(kāi)高爾基體，轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜上，小泡中物質(zhì)釋放到細(xì)胞膜外．因此放射性物質(zhì)在細(xì)胞結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)的先后順序是核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、細(xì)胞膜．
（5）單克隆抗體的化學(xué)本質(zhì)蛋白質(zhì)，由雜交瘤細(xì)胞合成并分泌．
（6）第二次篩選是通過(guò)抗體檢測(cè)的方法，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞．
故答案為：
（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 
（2）篩選雜交瘤細(xì)胞
（3）使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的（或單一細(xì)胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）
（4）核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、細(xì)胞膜
（5）蛋白質(zhì)        雜交瘤細(xì)胞
（6）抗體檢測(cè)      篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞

點(diǎn)評(píng) 本題以單克隆抗體制備流程階段示意圖為載體，考查單克隆抗體制備的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)圖和分析能力．單克隆抗體制備有兩次篩選：篩選得到雜交瘤細(xì)胞（去掉未雜交的細(xì)胞以及自身融合的細(xì)胞）；篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群．