Question

轉(zhuǎn)基因克隆豬已經(jīng)在我國(guó)培育成功．研究組首先從豬胎兒皮膚中分離出纖維細(xì)胞，進(jìn)行體外培育．通過(guò)電穿孔的方法將構(gòu)建好的基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入纖維細(xì)胞，經(jīng)篩選后將基因纖維細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞克�。�接著，將重組胚胎移入代孕母豬體內(nèi)，最終獲得轉(zhuǎn)基因克隆豬．請(qǐng)回答：
（1）在對(duì)纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，需要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的

 

，以防止培養(yǎng)過(guò)程的污染，此外，應(yīng)定期更換，防止對(duì)細(xì)胞自身造成危害．
（2）篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞時(shí)，需要利用基因表達(dá)載體中

 

的作用．
（3）在進(jìn)行體細(xì)胞克隆前，先要從屠宰場(chǎng)收集豬卵巢，采集

 

，并在體外培養(yǎng)成熟．然后將轉(zhuǎn)基因纖維細(xì)胞注入到

 

中，再經(jīng)過(guò)一系列過(guò)程獲得含有目的基因重組胚胎．
（4）為了

 

，可以對(duì)處于

 

階段的胚胎進(jìn)行均等分割．將重組胚胎移入到受體子宮中，由于受體子宮不會(huì)對(duì)外來(lái)胚胎發(fā)生

 

，并能與之建立正常的生理和組織上的聯(lián)系，因次，重組胚胎能在受體子宮中繼續(xù)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因克隆豬．

Answer 1

考點(diǎn)：動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過(guò)程,胚胎移植

專題：

分析：1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．
2、胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)：a．胚胎在移植前后所處的生理環(huán)境保持一致；b．哺乳動(dòng)物的早期胚胎形成后處于游離狀態(tài)；c．受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)；d．供體胚胎可與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系，但供體胚胎的遺傳特性不受任何影響．
3、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取（從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)體外擴(kuò)增、化學(xué)合成法）；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與鑒定．標(biāo)記基因的作用是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)．

解答： 解：（1）在對(duì)纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，需要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防止培養(yǎng)過(guò)程的污染，此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止對(duì)細(xì)胞自身造成危害．
（2）篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞時(shí)，需要利用基因表達(dá)載體中標(biāo)記基因的作用，篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞．
（3）在進(jìn)行體細(xì)胞克隆前，先要從屠宰場(chǎng)收集豬卵巢，采集卵母細(xì)胞，并在體外培養(yǎng)成熟．然后將轉(zhuǎn)基因纖維細(xì)胞注入到去核卵母細(xì)胞中，再經(jīng)過(guò)一系列過(guò)程獲得含有目的基因重組胚胎．
（4）對(duì)處于桑椹胚或囊胚階段的胚胎進(jìn)行均等分割，可以提高重組胚胎的利用率．將重組胚胎移入到受體子宮中，由于受體子宮不會(huì)對(duì)外來(lái)胚胎發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，并能與之建立正常的生理和組織上的聯(lián)系，因次，重組胚胎能在受體子宮中繼續(xù)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因克隆豬．
故答案為：
（1）抗生素                培養(yǎng)液
（2）標(biāo)記基因
（3）卵母細(xì)胞            去核卵母細(xì)胞
（4）提高重組胚胎的利用率       桑椹胚或囊胚      免疫排斥反應(yīng)

點(diǎn)評(píng)：本題主要考查學(xué)生對(duì)知識(shí)的記憶和理解能力．胰蛋白酶只有在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中才會(huì)用，是因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞在分裂過(guò)程中會(huì)貼壁生長(zhǎng)和接觸性抑制，用胰蛋白酶處理后細(xì)胞間質(zhì)后，細(xì)胞分散開(kāi)才能分裝到更多培養(yǎng)瓶中，而胚胎分割不用．