Question

13．請回答下列有關(guān)微生物培養(yǎng)和分離的問題．
（1）篩選石油分解菌一般要經(jīng)過如下的步驟：海水取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→將樣品涂布到培養(yǎng)基上→挑選菌落，其中第二步的目的是增加石油分解菌濃度．
（2）培養(yǎng)微生物時，獲得純潔培養(yǎng)物的關(guān)鍵是無菌操作（防止雜菌污染）．為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行．采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時，為防止冷凝水影響細(xì)菌的生長，需將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)．
（3）在菌種保藏時，對于我們頻繁使用的菌種一般采用臨時保藏的方法，但這種方法有兩個缺點：保存的時間不長；菌種易被污染或產(chǎn)生變異．
（4）做完實驗將培養(yǎng)基倒掉之前，一定要進(jìn)行滅菌處理．
（5）現(xiàn)有5種酵母菌的營養(yǎng)缺陷型菌株1、2、3、4、5，它們不能合成生長所必需的物質(zhì)G，已知A、B、C、D、E都是合成G物質(zhì)的必需中間產(chǎn)物，但不知這些物質(zhì)合成的順序，于是在培養(yǎng)基中分別加入這幾種物質(zhì)并分析了這幾種物質(zhì)對各種營養(yǎng)缺陷型菌株生長的影響結(jié)果如下表所示．
根據(jù)以上結(jié)果，推測這幾種物質(zhì)的合成順序應(yīng)是EACBDG．

突變體\物質(zhì)	培養(yǎng)基中加入的物質(zhì)
1	A	B	C	D	E	G
1	-	-	-	+	-	+
2	-	+	-	+	-	+
3	-	-	-	-	-	+
4	-+	+	+	+	-	+
5		+	+	+	-	+

+，表示生長-，表示不生長．

Answer 1

分析 本題主要考查微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用的相關(guān)問題，利用選擇培養(yǎng)基篩選出高效分解石油的細(xì)菌，其中涉及培養(yǎng)基的配置與選擇，器具的滅菌方法，細(xì)菌分離純化和保存的方法．

解答 解：（1）在實驗室篩選所要的特定菌種一般步驟為海水取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→將樣品涂布到培養(yǎng)基上→挑選菌落，其中選擇培養(yǎng)就是利用制成的富含石油選擇培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)菌，以增加石油分解菌濃度．
（2）培養(yǎng)微生物時，獲得純潔培養(yǎng)物的關(guān)鍵是無菌操作（防止雜菌污染）．為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行．采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時，為防止冷凝水影響細(xì)菌的生長，需將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)．
（3）在菌種保藏時，對于我們頻繁使用的菌種一般采用臨時保藏的方法，但這種方法有兩個缺點：保存的時間不長；菌種易被污染或產(chǎn)生變異．
（4）做完實驗將培養(yǎng)基倒掉之前，一定要進(jìn)行滅菌處理．
（5）由于題中給出G是必需的物質(zhì)，在5種突變菌株中只要加入G，都可以活下來，則G必然是最后的產(chǎn)物；凡是只加了E的都沒能存活，則E就是最開頭的產(chǎn)物．加A物質(zhì)，1、2、3、4均沒有存活，說明A物質(zhì)處于第二位；其他類推，C物質(zhì)處于第三位，B物質(zhì)處于第四位，D物質(zhì)處于第五位，因此這幾種物質(zhì)的合成順序應(yīng)是E→A→C→B→D→G．
故答案為：
（1）選擇培養(yǎng)     增加石油分解菌濃度
（2）無菌操作（防止雜菌污染）     酒精燈火焰       倒置
（3）保存的時間不長     菌種易被污染或產(chǎn)生變異
（4）滅菌         
（5）EACBDG

點評 本題主要考查微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用的相關(guān)問題，意在考查考生對微生物實驗室分離培養(yǎng)的步驟的理解．