Question

【題目】科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療．其技術(shù)流程如圖1：
（1）步驟①的技術(shù)名稱是 ．
（2）將基因?qū)�入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入到上皮細(xì)胞是因為ES細(xì)胞具有 ．
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有干擾素基因的 ． 由于DNA復(fù)制時，子鏈只能由5′向3′方向延伸，故構(gòu)建前利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時，可以從圖2A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取作為引物．對干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行酶切時，可選用限制酶的組合為或 ．
（4）將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)．為檢測干擾素基因是否表達(dá)，可以采用的方法．

Answer 1

【答案】
（1）細(xì)胞核
（2）ES細(xì)胞具有全能性
（3）基因表達(dá)載體；B和C；HindⅢ和PstⅠ；EcoRⅠ和PstⅠ
（4）綠；抗原﹣抗體雜交
【解析】解：（1）核移植是將體細(xì)胞核移植到去核的卵母細(xì)胞中，所以實驗前要去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核．（2）將基因?qū)�入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入到上皮細(xì)胞是因為ES細(xì)胞具有全能性．（3）步驟③是將目的基因?qū)�入ES細(xì)胞，該過程之前需要構(gòu)建基因表達(dá)載體；DNA復(fù)制只能從5’到3’，因此構(gòu)建前利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時，可以從圖2中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取B和C作為引物．由圖可知，SamⅠ酶的識別序列和切割位點(diǎn)位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因，因此對干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行酶切時，可選用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ．（4）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割時會破壞紅色熒光蛋白基因，但不會破壞綠色熒光蛋白基因，因此將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)綠色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)．為檢測干擾素基因是否表達(dá)，可以采用抗原﹣抗體雜交法． 所以答案是：（1）細(xì)胞核；（2）ES細(xì)胞具有全能性；（3）基因表達(dá)載體；B和C；HindⅢ和PstⅠ；EcoRⅠ和PstⅠ；（4）綠；抗原﹣抗體雜交
【考點(diǎn)精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術(shù)和動物細(xì)胞核移植技術(shù)的相關(guān)知識點(diǎn)，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)；動物體細(xì)胞核移植是將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新胚胎最終發(fā)育為動物個體才能正確解答此題．