Question

螢火蟲發(fā)光是由體內(nèi)熒光素酶催化系列反應(yīng)所產(chǎn)生的現(xiàn)象．如果熒光素酶存在于植物體內(nèi)，也可使植物體發(fā)光．一直以來熒光素酶的唯一來源都是從螢火蟲腹部提�。�但加利福尼亞大學(xué)的一位科學(xué)家成功地通過轉(zhuǎn)基因工程實現(xiàn)了將熒光素酶基因?qū)�入到大腸桿菌體內(nèi)，并在大腸桿菌體內(nèi)產(chǎn)生熒光素酶．請你根據(jù)已有的知識回答下列有關(guān)問題：
（1）在此轉(zhuǎn)基因工程中，目的基因是

 

，具體操作過程中下圖所示的粘性末端是由

 

種限制性酶作用產(chǎn)生的．

（2）在上述過程中需要多種酶的參與，其中包括限制酶、DNA聚合酶和

 

等．
（3）將目的基因?qū)�入到大腸桿菌體內(nèi)需要運載體的幫助．選取運載體時不必考慮的是

 

A．能夠在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并穩(wěn)定保存    B．具有特定的限制酶切點
C．具有與目的基因相同的堿基片段      D．具有某些標(biāo)記基因
（4）本實驗中將目的基因?qū)�入大腸桿菌最常用的運載體是

 

A．質(zhì)粒      B．動物病毒      C．噬菌體      D．植物病毒．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答： 解：（1）在此轉(zhuǎn)基因工程中，目的基因是熒光素酶基因；圖中所示的黏性末端都相同，但是由2種限制性核酸內(nèi)切酶作用產(chǎn)生的，其中第一個和第三個是由一種限制酶切割產(chǎn)生的，另外兩個是由另一種限制酶切割產(chǎn)生的．
（2）基因工程需要的工具酶包括限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶等．
（3）作為基因工程的運載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點； ②要有標(biāo)記基因（如抗性基因），以便于重組后重組子的篩選；③能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制；④是安全的，對受體細(xì)胞無害，而且要易從供體細(xì)胞分離出來．故選：C．
（4）常用的運載體有質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒，由于受體細(xì)胞是大腸桿菌，因此可選用質(zhì)粒和噬菌體的衍生物作為載體．故選：AC．
故答案為：
（1）熒光素酶基因  2
（2）DNA連接酶
（3）C
（4）AC

點評：本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理，掌握基因工程的工具及作用以及基因工程的具體操作步驟，能結(jié)合所學(xué)的知識轉(zhuǎn)答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．