Question

2．為了解基因結(jié)構(gòu)，通常選取一特定長(zhǎng)度的線性DNA分子，先用一種限制酶切割，通過(guò)電泳技術(shù)將單酶水解后的片段分離，計(jì)算相對(duì)大��；然后再用另一種酶對(duì)單酶水解片段再進(jìn)行降解，分析片斷大�。�下表是某小組進(jìn)行的相關(guān)實(shí)驗(yàn)．

已知一線性DNA序列共有5000bp（bp為堿基對(duì)）	第一步水解	（單位bp）	第二步水解	產(chǎn)物
	A酶切割	3500	將第一步水解產(chǎn)物分離后，分別用B酶切割	1500   2000
		1000		1000
		500		500
	B酶切割	2000	將第一步水解產(chǎn)物分離后，分別用A酶切割	500  1500
		3000		2000  1000
	經(jīng)A酶和B酶同時(shí)切割	2000    1500    1000      500

（1）該實(shí)驗(yàn)中體現(xiàn)出限制酶的作用特點(diǎn)是酶的專(zhuān)一性．
（2）由實(shí)驗(yàn)可知，在這段已知序列上，A酶與B酶的識(shí)別序列分別為2個(gè)和1個(gè)．
（3）根據(jù)表中數(shù)據(jù)，請(qǐng)?jiān)趫D1中用箭頭標(biāo)出相應(yīng)限制酶的酶切位點(diǎn)．
（4）已知BamHⅠ與BglⅡ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如圖2所示，用這兩種酶和DNA連接酶對(duì)一段含有數(shù)個(gè)BamHⅠ和BglⅡ識(shí)別序列的DNA分子進(jìn)行反復(fù)的切割、連接操作，若干次循環(huán)后和序列明顯增多，該過(guò)程中DNA連接酶催化磷酸二酯鍵鍵的形成．

Answer 1

分析 限制性核酸內(nèi)切酶是可以識(shí)別DNA的特異序列，并在識(shí)別位點(diǎn)或其周?chē)�切割雙鏈DNA的一類(lèi)內(nèi)切酶，簡(jiǎn)稱(chēng)限制酶．由表格分析可知A酶切割后有3段產(chǎn)物，說(shuō)明酶A有2個(gè)切割位點(diǎn)；B酶切割后有2段產(chǎn)物，說(shuō)明酶B有1個(gè)切割位點(diǎn)．

解答 解：（1）該實(shí)驗(yàn)中體現(xiàn)出限制酶的作用特點(diǎn)是酶的專(zhuān)一性．
（2）A酶切割后形成3段，所以有2個(gè)識(shí)別位點(diǎn)，B酶切割后形成2段，所以有1個(gè)切割位點(diǎn)．
（3）由于酶B只有一個(gè)限制酶切位點(diǎn)，即在2000和3000之間，可以先標(biāo)注出；又由于酶A又可以將2000的這段切成500和1500的，結(jié)合酶A單獨(dú)切割又可以標(biāo)注其切割位點(diǎn)，同理標(biāo)出另一個(gè)切割位點(diǎn)，答案如圖．

（4）巳知BamHI與BglII的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如圖2所示．用這兩種酶和DNA連接酶對(duì)一段含有數(shù)個(gè)BamHⅠ和BglⅡ識(shí)別序列的DNA分子進(jìn)行反復(fù)的切割、連接操作，若干循環(huán)后和序列明顯增多．DNA連接酶催化形成的是磷酸二酯鍵．
故答案為：
（1）酶的專(zhuān)一性
（2）2     1
（3）

（4）    磷酸二酯鍵

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖表，考查基因工程的原理及技術(shù)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、工具及操作步驟，重點(diǎn)考查要求理解和掌握限制酶和DNA連接酶的作用部位和作用對(duì)象，能結(jié)合表中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．