Question

研究表明，HER2/neu是一種原癌基因，它表達(dá)的H蛋白在多種惡性腫瘤特別是乳腺癌細(xì)胞中過量表達(dá)．抗H蛋白單克隆抗體能抑制過量表達(dá)H蛋白的乳腺癌細(xì)胞的生長，目前已成為有效的生物治療手段．
（1）選擇H蛋白作為單克隆抗體的作用靶點(diǎn)，是因?yàn)镠蛋白在成年個(gè)體的正常組織中

 

（填“低表達(dá)”或“高表達(dá)”）．H蛋白是一個(gè)跨膜蛋白，結(jié)構(gòu)如圖所示．制備免疫小鼠所用的H蛋白（抗原）時(shí)，應(yīng)構(gòu)建

 

區(qū)基因，轉(zhuǎn)入原核細(xì)胞表達(dá)并提純．
（2）將H蛋白注射到小鼠體內(nèi)，從該小鼠的脾臟中獲取相應(yīng)在B淋巴細(xì)胞，然后與

 

細(xì)胞進(jìn)行融合，使用的化學(xué)誘導(dǎo)劑是

 

，細(xì)胞融合的原理是

 

．
（3）將融合細(xì)胞在

 

培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時(shí)間后培養(yǎng)基中只有雜交瘤細(xì)胞生長．對上述雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和檢測，經(jīng)多次篩選，就能得到產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞．
（4）將篩選得到的雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過

 

或小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)，獲取大量的單克隆抗體．

Answer 1

考點(diǎn)：單克隆抗體的制備過程

專題：

分析：單克隆抗體的制備過程是：對小動(dòng)物注射抗原，從該動(dòng)物的脾臟中獲取效應(yīng)B細(xì)胞，將效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體．
誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有：物理法（離心、振動(dòng)）、化學(xué)法（聚乙二醇）、生物法（滅活的病毒）．

解答： 解：（1）根據(jù)題意可知，H蛋白在多種惡性腫瘤特別是乳腺癌細(xì)胞中過量表達(dá)，因此原癌基因的表達(dá)產(chǎn)物H蛋白在正常組織中低表達(dá)；由于抗體主要存在于細(xì)胞外液中，因此根據(jù)H蛋白的結(jié)構(gòu)圖可知，若用H蛋白制備抗原需要利用胞外區(qū)基因，由制備獲得的抗體作用于該抗原的胞外區(qū)．
（2）在制備單克隆抗體過程中，需要將脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，誘導(dǎo)其融合的試劑為聚乙二醇，其融合的原理是借助于細(xì)胞膜的流動(dòng)性．
（3）將融合細(xì)胞接種在選擇培養(yǎng)基中，從中選出雜交瘤細(xì)胞．
（4）將雜交瘤細(xì)胞經(jīng)過體外培養(yǎng)或小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)，獲得大量的單克隆抗體．
故答案為：
（1）低表達(dá)            胞外
（2）骨髓瘤     PEG（或“聚乙二醇”）       細(xì)胞膜的流動(dòng)性
（3）選擇
（4）體外（培養(yǎng)）

點(diǎn)評：本題結(jié)合抑制癌癥的材料考查了單克隆抗體的相關(guān)知識(shí)，要求考生能夠從題干和題圖中獲取有效解題信息；識(shí)記單克隆抗體的制備過程以及細(xì)胞融合的誘導(dǎo)技術(shù)，識(shí)記單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)等方面的知識(shí)．