Question

【題目】RT－PCR是將RNA逆轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增反應(yīng)相結(jié)合的技術(shù)，具體過(guò)程如圖所示：

(1)過(guò)程Ⅰ需要加入緩沖液、原料、_____________、_______________和引物A等。

(2)過(guò)程Ⅱ首先要將反應(yīng)體系的溫度升高到95 ℃，其目的是__________________、_______________。

(3)過(guò)程Ⅱ擬對(duì)單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，理論上至少需要_________個(gè)引物B。

(4)利用RT－PCR技術(shù)獲取的目的基因_______________ (填“能”或“不能”)在物種之間交流；該技術(shù)還可用于對(duì)某些微量RNA病毒的檢測(cè)，可提高檢測(cè)的靈敏度，原因是_______。

(5)RT－PCR過(guò)程中主要借助對(duì)__________的控制，影響酶的活性，從而使得化學(xué)反應(yīng)有序高效地進(jìn)行。

Answer 1

【答案】RNA提取物 逆轉(zhuǎn)錄酶 讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活 使mRNA－cDNA雜合雙鏈解開 2n－1 能 增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量(或濃度)，便于檢測(cè) 溫度

【解析】

對(duì)題圖進(jìn)行分析可知，過(guò)程Ⅰ以mRNA為模板合成cDNA的過(guò)程，表示逆轉(zhuǎn)錄。過(guò)程Ⅰ的產(chǎn)物是cDNA，cDNA與mRNA形成雜合雙鏈。過(guò)程Ⅱ首先將mRNA－cDNA雜合雙鏈解開，再以單鏈cDNA為模板合成雙鏈DNA，最后利用PCR技術(shù)進(jìn)行大量擴(kuò)增。

(1)過(guò)程Ⅰ以mRNA為模板合成cDNA的過(guò)程，表示逆轉(zhuǎn)錄，需要加入緩沖液、原料、RNA提取物、逆轉(zhuǎn)錄酶和引物A等。

(2)過(guò)程Ⅰ以mRNA為模板合成cDNA，形成cDNA-mRNA雜合雙鏈。因此，過(guò)程Ⅱ首先要將反應(yīng)體系的溫度升高到95 ℃，使mRNA－cDNA雜合雙鏈解開，同時(shí)讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活。

(3)根據(jù)DNA分子半保留復(fù)制的特點(diǎn)，對(duì)單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，理論上至少需要2n-1個(gè)引物B。

(4)不同生物體內(nèi)DNA分子的基本結(jié)構(gòu)相同，且所有的生物共用一套密碼子，因此利用RT－PCR技術(shù)獲取的目的基因能在物種之間交流。利用該技術(shù)增加了待測(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量(或濃度)，便于檢測(cè)。

(5)RT－PCR過(guò)程中主要借助對(duì)溫度的控制，影響酶的活性，從而使得化學(xué)反應(yīng)有序高效地進(jìn)行。