Question

10．綠色熒光蛋白（GFP）會(huì)發(fā)出綠色熒光，該蛋白質(zhì)在生物工程中有著廣闊的應(yīng)用前景．請(qǐng)據(jù)圖回答相關(guān)問(wèn)題：

（1）形成重組質(zhì)粒時(shí)，如果限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是一G↓GATCC一，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是一↓GATC一．在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個(gè)切點(diǎn)，在目的基因兩側(cè)各有一個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)．在DNA連接酶和上述兩種不同限制酶的作用下，能否將質(zhì)粒和目的基因連接起來(lái)？可以連接理由是由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同（可互補(bǔ)）．
（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，限制酶切點(diǎn)應(yīng)位于啟動(dòng)子和終止子之間，保證綠色熒光蛋白基因的正常表達(dá)．寫(xiě)出該基因表達(dá)過(guò)程包含的信息傳遞圖解：．
（3）在②過(guò)程進(jìn)行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞的篩選時(shí)的方法是轉(zhuǎn)基因細(xì)胞發(fā)出綠色熒光．
（4）在核移植過(guò)程中，乙兔提供的細(xì)胞應(yīng)是減數(shù)第二次分裂中期（次級(jí)）卵母細(xì)胞．
（5）通過(guò)推測(cè)氨基酸排序，可以找到對(duì)應(yīng)脫氧核苷酸序列，造出能吸收、發(fā)出不同顏色光的熒光蛋白，并能讓它們發(fā)光更久、更強(qiáng)烈．

Answer 1

分析 分析圖解，可以看出該熒光克隆兔涉及了多項(xiàng)生物工程技術(shù)．首先導(dǎo)入目的基因的甲兔的成纖維細(xì)胞要經(jīng)過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)篩選出轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞，然后該細(xì)胞與乙兔的卵細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞核移植獲得重組細(xì)胞，重組細(xì)胞經(jīng)過(guò)早期胚胎培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚期，最后經(jīng)過(guò)胚胎移植技術(shù)將早期胚胎移植到代孕母兔子宮內(nèi)，最后生成熒光克隆兔．該過(guò)程中利用基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)．

解答 解：（1）①限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-G^↓GATCC-，因此質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端為：．
②限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-^↓GATC-，因此目的基因兩側(cè)被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端為：．
③限制性內(nèi)切酶Ⅰ和限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)不同，但兩種切割形成的黏性末端相同，因此可在DNA連接酶的作用下連接起來(lái)，形成重組DNA分子$\frac{\underline{\;GGATC\;}}{CCTAG}$和$\frac{\underline{\;GATCC\;}}{CTAGG}$．
（2）啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，終止子的作用是使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止，所以構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，限制酶切點(diǎn)應(yīng)位于啟動(dòng)子和終止子之間，保證綠色熒光蛋白基因的正常表達(dá)．該基因表達(dá)過(guò)程包含的信息傳遞圖解：．
（3）在②過(guò)程進(jìn)行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞的篩選時(shí)，比較簡(jiǎn)易的篩選方法是轉(zhuǎn)基因細(xì)胞能否發(fā)出綠色熒光．
（4）在核移植過(guò)程中，乙兔提供的細(xì)胞應(yīng)是減數(shù)第二次分裂中期（次級(jí)）卵母細(xì)胞．
（5）通過(guò)推測(cè)氨基酸排序，可以找到 對(duì)應(yīng)脫氧核苷酸序列，造出能吸收、發(fā)出不同顏色光的熒光蛋白，并能讓它們發(fā)光更久、更強(qiáng)烈．
故答案為：
（1）可以連接                    由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同（可互補(bǔ)）
（2）啟動(dòng)子               終止子

（3）轉(zhuǎn)基因細(xì)胞發(fā)出綠色熒光
（4）減數(shù)第二次分裂中期（次級(jí)）卵母細(xì)胞
（5）對(duì)應(yīng)脫氧核苷酸序列

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程、細(xì)胞核移植技術(shù)、蛋白質(zhì)工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，分析問(wèn)題的能力及從圖中獲取相關(guān)的信息的能力．