Question

7．基因治療是指將外源正常基因?qū)�入靶�?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療目的．干擾素基因缺陷的小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞，科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對干擾素基因缺失的小鼠進(jìn)行了基因治療．請回答相關(guān)問題：
（1）為使干擾素基因在小鼠細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的啟動子和終止子之間，這個過程需要：限制酶和DNA連接酶 酶．構(gòu)建的表達(dá)載體，應(yīng)該要有標(biāo)記基因，它的作用是：鑒別和篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞
（2）在構(gòu)建含干擾素基因的表達(dá)載體前，可利用PCR技術(shù)對目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，該技術(shù)需在Taq酶（熱穩(wěn)定性DNA聚合酶）酶的作用下延伸脫氧核苷酸鏈．將干擾素基因?qū)�入ES細(xì)胞常用的方法是顯微注射法．
（3）為檢測干擾素基因的表達(dá)情況，可采用抗原-抗體雜交方法，若有雜交的，表明已成功合成了干擾素．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因表達(dá)載體的組成包括：目的基因、標(biāo)記基因、啟動子、終止子．來自cDNA文庫的基因是通過逆轉(zhuǎn)錄得到的，無啟動子和終止子等，將其插入在表達(dá)載體的啟動子和終止子之間才能構(gòu)成完整的基因并在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)．構(gòu)建基因表達(dá)載體時，首先要用限制酶切割外源DNA分子和運(yùn)載體，其次要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA分子；標(biāo)記基因的作用是鑒別和篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞．
（2）PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因；該技術(shù)需在Taq酶（熱穩(wěn)定性DNA聚合酶） 的作用下延伸脫氧核苷酸鏈．將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法．
（3）為檢測目的基因是否表達(dá)，可采用抗原-抗體雜交法．
故答案為：
（1）啟動子  終止子  限制酶和DNA連接酶    鑒別和篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞
（2）PCR   Taq酶（熱穩(wěn)定性DNA聚合酶）   顯微注射法    
（3）抗原-抗體雜交

點(diǎn)評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．