Question

【題目】轉(zhuǎn)座子是指能從基因組的一個位置移動到另一個位置的 DNA 片段。Ac 片段能編碼轉(zhuǎn)座 酶，可自主移動。DS片段需在轉(zhuǎn)座酶作用下，才可以從原來的位置上切離下來，然后隨機 插入到所在染色體的其他位置或其他染色體上。

（1）用________酶將 DS片段構(gòu)建在 Ti 質(zhì)粒的T-DNA 片段上，再用含有該重組質(zhì)粒的 ________轉(zhuǎn)化水稻，自交篩選獲得 DS-T-DNA純合體（甲）。以同樣方法獲得Ac-T-DNA 純合體水稻（乙）。

（2）甲、乙雜交獲得 Ac/Ds 雙因子轉(zhuǎn)座系統(tǒng)水稻，在其后代中篩選到一些淡綠葉突變體。 利用淡綠葉突變體與野生型水稻（甲）進行系列雜交實驗，________代獲得野生型和 淡綠葉水稻植株分別為 442 株和 130 株，分離比符合3：1，初步推測淡綠葉突變是單 基因的________性突變。將 442 株野生型植株單株收獲和播種，后代發(fā)生性狀分離的 植株占________，則進一步確認上述推測。

（3）為進一步確定突變性狀與 Ds 切離轉(zhuǎn)座的相關(guān)性，設(shè)計 6 種引物（如圖 1），對上述 572 株子代的 T-DNA 進行 Ds 轉(zhuǎn)座的 PCR 檢測。

①檢測原理：Ds 未發(fā)生切離的DNA位點，通過引物________可得到400 bp 的擴增產(chǎn)物；Ds 已發(fā)生切離的 DNA 位點通過引物________可得到 870 bp的擴增產(chǎn)物。

②擴增產(chǎn)物的電泳結(jié)果如圖 2，據(jù)此判斷________類型為淡綠葉突變體。

若A 類型：B 類型：C 類型=_______，則突變性狀產(chǎn)生與 Ds 片段的切離轉(zhuǎn)座有關(guān)。

Answer 1

【答案】限制酶和DNA連接酶 農(nóng)桿菌 子二(F2) 隱 2/3 b、d c、 d B 2:1:1

【解析】

根據(jù)題干信息分析，轉(zhuǎn)座子是指能從基因組的一個位置移動到另一個位置的 DNA 片段，DS片段從原來的位置上切離下來需轉(zhuǎn)座酶的作用�；�因工程常用的工具酶是限制酶和DNA連接酶。將基因表達載體導入水稻細胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。

（1）將DS片段構(gòu)建在Ti質(zhì)粒的T-DNA片段上，需要先用限制酶切割，再用DNA連接酶連接，接著用含有重且質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻，自交篩選獲得DS-T-DNA純合體（甲）。以同樣方法獲得Ac-T-DNA 純合體水稻（乙）。

（2）根據(jù)題意分析，利用淡綠葉突變體與野生型水稻（甲）進行系列雜交實驗，子一代為雜合子，子二代中出現(xiàn)性狀分離，野生型和淡綠葉水稻植株分別為 442 株和 130 株，分離比接近3：1，符合一對等位基因的雜合子自交實驗的性狀分離比，說明淡綠葉突變是單基因的隱性突變。如果上述推測是正確的，則雜交后代中442 株野生型植株中純合子：雜合子=1：2，將這442 株野生型植株單株收獲和播種，只有雜合子自交后代會發(fā)生性狀分離，即后代發(fā)生性狀分離的植株占2/3。

（3）①檢測原理：由于PCR擴增中子鏈是沿著引物的3，延伸，因此Ds 未發(fā)生切離的DNA位點，通過引物b、d可得到400 bp 的擴增產(chǎn)物；Ds 已發(fā)生切離的 DNA 位點通過引物c、d可得到 870 bp的擴增產(chǎn)物。

②擴增產(chǎn)物的電泳結(jié)果如圖 2，據(jù)此判斷B類型為淡綠葉突變體。

若A 類型：B 類型：C 類型=2：1：1，則突變性狀產(chǎn)生與 Ds 片段的切離轉(zhuǎn)座有關(guān)。