Question

【題目】農(nóng)作物秸稈中的纖維素阻礙了堆肥技術(shù)固體廢物領(lǐng)域的發(fā)展。為提高堆肥品質(zhì)，科研人員探究了溫度對(duì)纖維素分解菌分解能力的影響，實(shí)驗(yàn)步驟如下：①纖維素分解菌的篩選、分離及純化→②纖維素分解菌菌株數(shù)量測(cè)定→③纖維素酶活力測(cè)定和降解濾紙能力的檢測(cè)。請(qǐng)回答下列問題：

（1）步驟①中，若用稀釋涂布平扳法接種，則必須將菌液進(jìn)行一系列的____________。

（2）步驟②中，在條件適宜的環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)菌10d后，用____________（填—種實(shí)驗(yàn)用具）在顯微鏡下可計(jì)算細(xì)菌數(shù)量。此方法中的“條件”至少包括：適宜溫度、以____________作為唯一碳源的____________（填“固態(tài)”、“半固態(tài)”或“液態(tài)”）培養(yǎng)基等，可用臺(tái)盼藍(lán)染液鑒定視野中細(xì)菌是否死亡，原理是____________。

（3）步驟③中，酶活力可用培養(yǎng)基上菌落直徑及____________來表示。

Answer 1

【答案】梯度稀釋 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板 纖維素 液態(tài) 活細(xì)菌的細(xì)胞膜具有選擇透過性，不會(huì)被臺(tái)盼藍(lán)染色 菌落周圍透明圈大小

【解析】

①液體培養(yǎng)基是擴(kuò)大培養(yǎng)的常用手段。利用稀釋涂布平板法接種微生物，經(jīng)過培養(yǎng)可獲得單菌落，便于計(jì)數(shù)。稀釋涂布平板法是指將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。②篩選纖維素分解菌需使用以纖維素作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，可用剛果紅染色法進(jìn)行篩選，其原理是：剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和纖維素水解后形成的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生顏色反應(yīng)；當(dāng)纖維素被纖維素酶水解后，剛果紅-纖維素復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。③活細(xì)胞的細(xì)胞膜對(duì)物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞具有選擇透過性，可以阻止活細(xì)胞不需要的臺(tái)盼藍(lán)染色劑進(jìn)入，因此活細(xì)胞不能被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色；當(dāng)細(xì)胞死亡后，細(xì)胞膜的選擇透過性喪失，臺(tái)盼藍(lán)染色劑才能進(jìn)入細(xì)胞。

(1) 步驟①中，若用稀釋涂布平扳法接種，則必須將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋。

(2)對(duì)于細(xì)菌的計(jì)數(shù)，可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)算細(xì)菌數(shù)量。液態(tài)培養(yǎng)基有利于獲得大量菌體，對(duì)纖維素分解菌的菌株數(shù)量進(jìn)行測(cè)定，需要提供有利于纖維素分解菌生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)，所以其培養(yǎng)條件包括：適宜溫度、以纖維素作為唯一碳源的液態(tài)培養(yǎng)基等。由于活細(xì)菌的細(xì)胞膜具有選擇透過性，不會(huì)被臺(tái)盼藍(lán)染色，因此可用臺(tái)盼藍(lán)染液鑒定視野中細(xì)菌是否死亡。

(3) 纖維素分解菌產(chǎn)生的纖維素酶可將培養(yǎng)基中的纖維素分解，導(dǎo)致菌落的周圍出現(xiàn)透明圈，而且透明圈越大，說明纖維素分解菌產(chǎn)生的纖維素酶的活性越強(qiáng)，對(duì)纖維素的分解和利用越快，細(xì)菌繁殖的越多�？梢�，步驟③中，酶活力可用培養(yǎng)基上菌落直徑及菌落周圍透明圈的大小來表示。