Question

4．Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細胞．科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療．其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的細胞核．
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時，可從其內(nèi)細胞團分離出ES細胞．
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag₂基因的表達載體．可以根據(jù)Rag₂基因的核苷酸序列設計引物，利用PCR技術(shù)擴增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進行酶切獲得Rag₂基因片段．為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點．
（4）為檢測Rag₂基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的蛋白質(zhì)，用抗Rag₂蛋白的抗體進行雜交實驗．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養(yǎng)過程，③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細胞．

解答 解：（1）核移植是指將體細胞核移植到去核卵母細胞中，因此①核移植過程中，在核移植前應去除卵母細胞的細胞核．
（2）內(nèi)細胞團位于囊胚中，所以步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時，可從其內(nèi)細胞團分離出ES細胞．
（3）步驟③中，根據(jù)Rag₂基因的核苷酸序列設計引物并擴增Rag₂基因片段．基因工程中構(gòu)建基因表達載體時，應用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，若用HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側(cè)進行酶切獲得Rag₂基因片段，則為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點．
（4）為檢測Rag₂基因的表達情況，可采用抗原-抗體雜交法，即提取治療后的小鼠骨髓細胞的蛋白質(zhì)（抗原），用抗Rag₂蛋白的抗體進行雜交實驗．
故答案為：
（1）細胞核  
（2）囊胚  
（3）核苷酸序列　HindⅢ和PstⅠ
（4）蛋白質(zhì)

點評 本題結(jié)合圖解，綜合考查基因工程、細胞工程和胚胎工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)問題；識記核移植的具體過程；識記體外受精的具體過程及早期胚胎發(fā)育的過程，能結(jié)合所學的知識準確答題．