Question

在培育轉基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作為標記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長．如圖為獲得抗蟲棉的技術流程．請據(jù)圖回答：

（1）A過程需要的酶有

 

．
（2）要把重組質粒導入土壤農(nóng)桿菌，首先必須用

 

處理土壤農(nóng)桿菌，使土壤農(nóng)桿菌轉變?yōu)?div id="gxhizio" class='quizPutTag' contenteditable='true'> 

態(tài)；然后將

 

在緩沖液中混合培養(yǎng)完成轉化過程．
（3）含有重組質粒的土壤農(nóng)桿菌侵染離體棉花葉片組織后，將離體棉花葉片組織培養(yǎng)成再生植株要經(jīng)過[C]

 

和[E]

 

．如要確保再生植株中含有抗蟲基因，可在C過程的培養(yǎng)基中加入

 

．
（4）如想利用分子雜交技術檢測再生植株中的抗蟲基因是否轉錄，應該用放射性同位素標記的目的基因作為探針與

 

雜交．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術,植物培養(yǎng)的條件及過程

專題：

分析：分析題圖：圖示為利用生物技術獲得生物新品種的過程示意圖，其中A表示基因表達載體的構建過程；B表示用選擇培養(yǎng)基篩選含有重組質粒的土壤農(nóng)桿菌的過程；C表示脫分化過程；D為愈傷組織；E表示再分化過程．

解答： 解：（1）圖中A為基因表達載體的構建過程，該過程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，還需DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組質粒．
（2）將重組質粒導入微生物細胞時，常采用感受態(tài)細胞法，即首先用Ca²⁺處理微生物細胞，使之成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞；然后將將重組質粒和感受態(tài)細胞在緩沖液中混合培養(yǎng)完成轉化過程．
（3）將離體棉花葉片組織培養(yǎng)成再生植株還需要采用植物組織培養(yǎng)技術，該技術包括脫分化和再分化兩個過程．由圖可知，標記基因時卡那霉素抗性基因，因此可用含有卡那霉素的培養(yǎng)基篩選含有抗蟲基因的再生植株．
（4）檢測目的基因是否轉錄出mRNA常采用分子雜交技術，即以標記的目的基因為探針與mRNA分子雜交．
故案為：
（1）（同一種）限制酶、DNA連接酶
（2）Ca²⁺    感受    將重組質粒和感受態(tài)細胞
（3）脫分化、再分化   卡那霉素
（4）mRNA

點評：本題結合轉基因抗蟲植株的培育過程圖，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)的相關知識，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟，能準確判斷圖中各過程的名稱；識記植物組織培養(yǎng)的過程及應用，能結合圖中信息答題．