Question

5．下面是探究如何從土壤中分離出自生固氮菌與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)，完成下列問(wèn)題：實(shí)驗(yàn)原理：農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多．將用表層土壤制成的稀泥漿，接種到無(wú)氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)．在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長(zhǎng)繁殖．用這種方法，可以將自生固氮菌與其他細(xì)菌分離．材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛有9mL無(wú)菌水的試管、無(wú)菌吸管、無(wú)菌涂布器、無(wú)菌培養(yǎng)皿、盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶、恒溫箱．
（1）方法步驟：
①倒平板：分別將無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，應(yīng)在酒精燈火焰旁操作．
②制備土壤稀釋液：取土樣10g加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻．用無(wú)菌吸管吸取上清液1mL，轉(zhuǎn)至盛有9mL的無(wú)菌水的試管中，依次稀釋到10⁷稀釋度．
③涂布：按照由107～103稀釋度的順序分別吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布，每個(gè)稀釋度下，無(wú)氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布3　個(gè)平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布1個(gè)．
④培養(yǎng)：放入恒溫箱內(nèi)，在28℃～30℃下培養(yǎng)3d～4d．
⑤細(xì)菌的計(jì)數(shù)：當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．如果測(cè)定的平均值為50，則每克樣品中的菌株數(shù)是5×10⁷．（稀釋度是10⁵）
（2）預(yù)期結(jié)果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)多于�。ㄟx填“多于”或“少于”）無(wú)氮培養(yǎng)基上的數(shù)目．原因是無(wú)氮培養(yǎng)基上只有自生固氮菌能生長(zhǎng)繁殖，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上大多數(shù)菌類都能生長(zhǎng)．
（3）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的操作過(guò)程是：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．

Answer 1

分析 1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：
（1）計(jì)算：依據(jù)是培養(yǎng)基配方的比例．
（2）稱量：牛肉膏比較黏稠，可同稱量紙一塊稱取．牛肉膏和蛋白胨易吸潮，稱取時(shí)動(dòng)作要迅速，稱后及時(shí)蓋上瓶蓋．
（3）溶化：牛肉膏和稱量紙+水加熱取出稱量紙→加蛋白胨和氯化鈉→加瓊脂（注意：要不斷用玻璃棒攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂）→補(bǔ)加蒸餾水至100mL．
（4）調(diào)pH；
（5）滅菌：培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)皿采用干熱滅菌．
（6）倒平板．
3、為避免實(shí)驗(yàn)誤差，保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3～5個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值．

解答 解：（1）①在酒精燈火焰旁倒平板，可以減少雜菌污染．
③為了避免實(shí)驗(yàn)誤差，保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3～5個(gè)平板，空白對(duì)照組需要牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布1個(gè)．
⑤選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值．如果測(cè)定的平均值為50，則每克樣品中的菌落數(shù)為（50÷0.1）×10⁵=5×10⁷．
（2）肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照，以消除無(wú)關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，該培養(yǎng)基適合其他細(xì)菌生存，所以，它比無(wú)氮培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目多．
（3）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．
故答案為：
（1）酒精燈火焰    3   1   30～300   5×10⁷
（2）多于    無(wú)氮培養(yǎng)基上只有自生固氮菌能生長(zhǎng)繁殖，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上大多數(shù)菌類都能生長(zhǎng)
（3）計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記制備培養(yǎng)基的一般步驟，掌握微生物計(jì)數(shù)常用的方法，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．