Question

15．嚴(yán)重復(fù)合型免疫缺陷癥的基因治療方法是：先從病人體內(nèi)獲得淋巴細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，然后將腺苷酸脫氨酶基因利用逆轉(zhuǎn)錄病毒作為運(yùn)載體轉(zhuǎn)移到淋巴細(xì)胞，再篩選成功轉(zhuǎn)移的細(xì)胞增殖培養(yǎng)，最后重新輸入患者體內(nèi)．回答下列問(wèn)題：
（1）體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞，應(yīng)保證處于無(wú)菌、無(wú)毒環(huán)境，在合成培養(yǎng)基中通常加入適量的血清（血漿）等天然成分，培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO₂的培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO₂的作用是維持培養(yǎng)液的PH．
（2）該基因治療過(guò)程是在逆轉(zhuǎn)錄病毒的逆（反）轉(zhuǎn)錄酶作用下，使RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA，與目的基因整合后插入到淋巴細(xì)胞基因組中．基因表達(dá)載體除含有目的基因外，還必須含有啟動(dòng)子、終止子等控制基因表達(dá)的信號(hào)序列．
（3）淋巴細(xì)胞主要在人體的骨髓（器官）中分化形成，并參與人體的特異性免疫．
（4）淋巴細(xì)胞的DNA上是否插入了目的基因，一般用放射性同位素（熒光）標(biāo)記的腺苷酸脫氨酶基因作為探針，進(jìn)行DNA分子雜交檢測(cè)．

Answer 1

分析 1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程：取動(dòng)物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：
（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．
3、基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因
4、基因探針--用放射性同位素（或熒光分子）標(biāo)記的含有目的基因DNA片段．

解答 解：（1）體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞，應(yīng)保證處于無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境，在合成培養(yǎng)基中通常加入適量的血清、血漿等天然成分，培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO₂的培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO₂的作用是維持培養(yǎng)液的PH．
（2）該基因治療過(guò)程是在逆轉(zhuǎn)錄病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶作用下，使RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA，與目的基因整合后插入到淋巴細(xì)胞基因組中．基因表達(dá)載體除含有目的基因外，還必須含有啟動(dòng)子、終止子等控制基因表達(dá)的信號(hào)序列．
（3）淋巴細(xì)胞主要在人體的骨髓中分化形成，并參與人體的特異性免疫．
（4）淋巴細(xì)胞的DNA上是否插入了目的基因，一般用放射性同位素（熒光）標(biāo)記的腺苷酸脫氨酶基因作為探針，進(jìn)行DNA分子雜交檢測(cè)．
故答案為：
（1）無(wú)菌、無(wú)毒        血清（血漿）      維持培養(yǎng)液的PH
（2）逆（反）轉(zhuǎn)錄酶       啟動(dòng)子、終止子
（3）骨髓        特異性
（4）放射性同位素（熒光）

點(diǎn)評(píng) 本題考查動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、基因工程等相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的識(shí)記能力和理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，準(zhǔn)確判斷問(wèn)題的能力．