Question

（8分）下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。請回答：

（1）天然質(zhì)粒往往需經(jīng)過改造才能作為基因工程中的運載體，經(jīng)改造后的質(zhì)粒同時具備的條件有 （填序號）。

①標記基因 ②多個限制酶切割位點 ③對受體細胞無害 ④啟動子 ⑤起始密碼子

（2）若對圖1中質(zhì)粒進行改造，插入的SmaⅠ酶切位點越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性將會 。

（3）用圖2中的人乳鐵蛋白目的基因和圖1所示的質(zhì)粒構建重組質(zhì)粒時，選用的限制酶是 （從“EcoRⅠ”、“BamHⅠ/ HindⅢ”、“SmaⅠ/ HindⅢ”中選擇）。不能選擇其他限制酶的理由分別是 。

（4）圖3中，①常用的導入方法是 ，為了獲得雌性轉(zhuǎn)基因牛，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進行 ，③過程選用的早期胚胎應發(fā)育到 階段。

 

Answer 1

（8分，除注明的外，每空1分）（1）①②③④（不全不給分） （2）提高

（3）BamHⅠ/ HindⅢ 若選EcoRⅠ會破壞質(zhì)粒的復制原點（1分）；若選SmaⅠ/ HindⅢ，則構建的重組質(zhì)粒沒有標記基因或復制原點（1分） （4）顯微注射法 性別鑒定 桑椹胚或囊胚

【解析】

試題分析：（1）作為運載體必須具有四個條件：①在宿主細胞中能保存下來并能大量復制；②有多個限制酶切點，而且每種酶的切點最好只有一個，可適于多種限制酶切割的DNA插入；③有一定的標記基因，便于進行篩選。④對受體細胞無害。一般來說，天然運載體往往不能滿足上述要求，因此需要根據(jù)不同的目的和需要，對運載體進行人工改建。一個基因表達載體的組成，除了目的基因外，還必須有啟動子、終止子以及標記基因等。因此經(jīng)改造后的質(zhì)粒同時具備的條件有①②③④。起始密碼子位于mRNA上，不存在于質(zhì)粒中。

（2）SmaⅠ的酶切位點是CCC↓GGG，而雙鏈中C-G互補配對形成3個氫鍵，A-T互補配對形成2個氫鍵，若插入的SmaⅠ酶切位點越多，質(zhì)粒的CCCGGG序列就越多，熱穩(wěn)定性將會提高。

（3）用圖2中的人乳鐵蛋白目的基因和圖1所示的質(zhì)粒構建重組質(zhì)粒時，選用的限制酶是BamHⅠ/ HindⅢ，既可以獲得目的基因，也可以保留標記基因——Ampr，且不破壞復制原點。若選EcoRⅠ會破壞質(zhì)粒的復制原點；若選SmaⅠ/ HindⅢ，則構建的重組質(zhì)粒沒有標記基因或復制原點。

（4）目的基因?qū)�入動物細胞最常用和最有效的方法是顯微注射法，為了獲得雌性轉(zhuǎn)基因牛，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進行性別鑒定，③過程為胚胎移植，選用的早期胚胎應發(fā)育到桑椹胚或囊胚階段。

考點：本題考查基因工程的原理及技術、胚胎工程的應用，意在考查學生能用文字、圖表以及數(shù)學方式等多種表達形式準確地描述生物學方面的內(nèi)容；能獨立完成“生物知識內(nèi)容表”所列的生物實驗，包括理解實驗目的、原理、方法和操作步驟，掌握相關的操作技能，并能將這些實驗涉及的方法和技能進行綜合運用。