Question

3．某研究性學習小組同學為了調查北江河中細菌的污染情況進行了實驗．實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數．請回答與此實驗相關的問題．
（1）實驗中制備的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的部分成分列表如下：

成分	牛肉膏	蛋白胨	NaCl	蒸餾水
含量	0.5g	1g	0.5g	100ml

表中各成分含量的比例確定的原則是根據所培養(yǎng)微生物對各營養(yǎng)成分的需求量（比例）．
（2）對培養(yǎng)基進行滅菌，通常采用的方法是高壓蒸汽滅菌．為了使培養(yǎng)基達到良好的滅菌效果，一般在壓力為l00kPa，溫度為121℃℃的條件下，維持15～30min．
（3）為了更好的對細菌計數，一般采用的接種方法是稀釋涂布平板法，該方法的操作是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后再分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面．
（4）接種后放在恒溫箱培養(yǎng)一段時間后，為保證結果準確，選擇菌落數在30～300的平板進行計數．該組同學在菌落計數時發(fā)現，統(tǒng)計的菌落比實際數目要低，可能的原因是某些菌落可能是由兩個或多個細菌連在一起形成．

Answer 1

分析 1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求．對異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是起單一方面的作用．
2、實驗室的滅菌方法一般有灼燒滅菌（適合于接種工具的滅菌）、干熱滅菌（適合于耐高溫的、需要保持干燥的物品的滅菌）、高壓蒸汽滅菌（適合于培養(yǎng)基等物體的滅菌）．

解答 解：（1）培養(yǎng)基配置的過程中，成分含量的比例確定的原則是根據所培養(yǎng)微生物對各營養(yǎng)成分的需求量（比例）．
（2）對培養(yǎng)基進行滅菌，通常采用的方法是高壓蒸汽滅菌．即將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100 kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30 min．
（3）為了更好的對細菌計數，一般采用的接種方法是稀釋涂布平板法，該方法的操作是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后再分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面．
（4）接種后放在恒溫箱培養(yǎng)一段時間后，為保證結果準確，選擇菌落數在30～300的平板進行計數．由于某些菌落可能是由兩個或多個細菌連在一起形成，因此統(tǒng)計的菌落比實際數目要低．
故答案為：
（1）根據所培養(yǎng)微生物對各營養(yǎng)成分的需求量（比例）    
（2）高壓蒸汽滅菌（答蒸氣不得分）    121℃
（3）稀釋涂布平板法    梯度稀釋    涂布
（4）30～300    某些菌落可能是由兩個或多個細菌連在一起形成

點評 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關知識，要求考生能夠識記培養(yǎng)基的成分以及配置的原則，掌握滅菌的方法，識記稀釋涂布平板法的相關操作步驟．