【題目】圖(a)中的三個DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三種限制性內(nèi)切酶的識別序列與切割位點,圖(b)為某種表達載體示意圖(載體上的EcoR I、Sau3A I的切點是唯一的)。

根據(jù)基因工程的有關知識,回答下列問題:

(1)經(jīng)BamH I酶切割得到的目的基因可以與上述表達載體被____________酶切后的產(chǎn)物連接,理由是____________。

(2)若某人利用圖(b)所示的表達載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子,如圖(c)所示。這三種重組子中,不能在宿主細胞中表達目的基因產(chǎn)物的有____________,不能表達的原因是____________

(3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶,常見的有_______________________,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是____________。

【答案】 Sau3A I 兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端 甲和丙 甲中目的基因插入在啟動子的上游,丙中目的基因插入在終止子的下游,兩者目的基因均不能轉錄 EcoliDNA連接酶 T4DNA連接酶 T4DNA 連接酶

【解析】試題分析:根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點確定限制酶的種類

①應選擇切點位于目的基因兩端的限制酶;②不能選擇切點位于目的基因內(nèi)部的限制酶;③為避免目的基因和質粒的自身環(huán)化和隨意連接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和質粒,但要確保質粒上也有這兩種酶的切點。

(1)由于限制酶Sau3AⅠ與BamHⅠ切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端,所以經(jīng)BamH I酶切割得到的目的基因可以與上述表達載體被Sau3AⅠ酶切后的產(chǎn)物連接。

(2)啟動子是一段有特殊序列的DNA片段,它是RNA聚合酶識別和結合的部位,有了它才能驅動基因轉錄出mRNA,最終獲得所需要的蛋白質。終止子也是一段有特殊結構的DNA短片段,相當于一盞紅色信號燈,使轉錄在所需要的地方停止下來。在基因表達載體中,啟動子應位于目的基因的首端,終止子應位于目的基因的尾端,這樣目的基因才能表達。而圖甲中目的基因插入在啟動子的上游,丙中目的基因插入在終止子的下游,兩者目的基因均不能轉錄,所以都不能表達目的基因的產(chǎn)物。

(3)常見的DNA連接酶有EcoliDNA連接酶和T4DNA連接酶,其中T4DNA連接酶既能連接黏性末端又能連接平末端。

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