Question

【題目】為制備目的基因Y（圖1）與質(zhì)粒X（圖2）的重組DNA，將質(zhì)粒X與含Y的DNA片段加入含有限制性核酸內(nèi)切酶BgⅠⅡ與BamHⅠ的反應(yīng)混合物中，酶切后的片段再加入含有連接酶的反應(yīng)體系中．其中，質(zhì)粒X含有leu2基因，可用于合成亮氨酸，目的基因Y含有卡那霉素抗性基因KanR。

（1）根據(jù)圖3分別寫(xiě)出BgⅠⅡ與BamHⅠ酶切后形成的末端序列：_____、_____。

（2）BgⅠⅡ酶切后的質(zhì)粒與BamHⅠ酶切后的目的基因Y能夠連接的原因是_____。

將連接后的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入一種Z細(xì)菌，Z細(xì)菌對(duì)卡那霉素敏感，且不能在缺乏亮氨酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

（3）使用BgⅠⅡ處理重組質(zhì)粒，可以得到_____。

A．長(zhǎng)度為3300bp的環(huán)狀DNA

B．長(zhǎng)度為3300bp的線形DNA

C．長(zhǎng)度為2800bp和500bp的線形DNA

D．長(zhǎng)度為2800bp的環(huán)狀DNA

（4）要篩選含有重組質(zhì)粒的Z細(xì)胞，應(yīng)選擇_____。

A．卡那霉素和亮氨酸均含的培養(yǎng)基

B．卡那霉素和亮氨酸均不含的培養(yǎng)基

C．含卡那霉素但不含亮氨酸的培養(yǎng)基

D．含亮氨酸但不含卡那霉素的培養(yǎng)基

Answer 1

【答案】 酶切后產(chǎn)生相同的黏性末端，并遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 A C

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣.將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù).個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）限制酶BgⅠⅡ與BamHⅠ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如圖：

，

因此它們切割形成的末端序列依次為：

、。

（2）BgⅠⅡ酶切后的質(zhì)粒與BamHⅠ酶切后的目的基因Y具有相同的黏性末端，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，它們能夠連接形成重組DNA。

（3）BgⅠⅡ酶切后的質(zhì)粒與BamHⅠ酶切后的目的基因形成的重組DNA分子上沒(méi)有BgⅠⅡ酶的識(shí)別序列，因此使用BgⅠⅡ處理重組質(zhì)粒，可以得到長(zhǎng)度為3300bp的環(huán)狀DNA。

（4）由于質(zhì)粒X含有leu2基因，可用于合成亮氨酸，目的基因Y含有卡那霉素抗性基因KanR，因此要篩選含有重組質(zhì)粒的Z細(xì)胞，應(yīng)選擇含卡那霉素但不含亮氨酸的培養(yǎng)基。