Question

16．家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因能力．將人干擾素基因?qū)爰倚Q細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥．
（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞．
（2）為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的啟動(dòng)子和終止子之間．若要檢測(cè)干擾素基因在家蠶細(xì)胞中是否表達(dá)，可以采用的方法有分子雜交技術(shù)、抗原-抗體雜交技術(shù)．
（3）通過(guò)PCR技術(shù)可大量獲取目的基因，PCR反應(yīng)體系的主要包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、引物和耐高溫的DNA聚合酶．
（4）培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生接觸抑制．通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換．
（5）“�；~(yú)塘”生態(tài)系統(tǒng)能充分利用廢棄物中的能量，形成“無(wú)廢棄物農(nóng)業(yè)”，這主要是遵循生態(tài)工程的物質(zhì)循環(huán)再生原理．同時(shí)，通過(guò)飼養(yǎng)家禽、家畜，栽培食用菌，提高農(nóng)民經(jīng)濟(jì)收入，使保護(hù)環(huán)境和發(fā)展經(jīng)濟(jì)相互協(xié)調(diào)，這有體現(xiàn)了生態(tài)工程的整體性原理．

Answer 1

分析 基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲��；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)．從分子水平上檢測(cè)目的基因的方法：（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．

解答 解：（1）為了使組織分散開(kāi)為單個(gè)細(xì)胞通常用胰蛋白酶或膠原蛋白酶．
（2）基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因．啟動(dòng)子位于目的基因的首端，終止子位于目的基因的尾端．若要檢測(cè)干擾素基因在家蠶細(xì)胞中是否表達(dá)，采用的技術(shù)有DNA-RNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)是否轉(zhuǎn)錄形成RNA和用抗原-抗體雜交技術(shù)檢測(cè)是否有表達(dá)產(chǎn)物產(chǎn)生．
（3）通過(guò)PCR技術(shù)可大量獲取目的基因，PCR反應(yīng)體系的主要包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、引物和耐高溫的DNA聚合酶．
（4）利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生接觸抑制．通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換．
（5）�；~(yú)塘生態(tài)系統(tǒng)能充分利用廢棄物中的能量，形成無(wú)廢棄物農(nóng)業(yè)，這主要遵循了生態(tài)工程的物質(zhì)循環(huán)再生原理．
故答案為：
（1）胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）
（2）啟動(dòng)子   終止子     
（3）引物     耐高溫的DNA聚合酶
（4）增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積
（5）物質(zhì)循環(huán)再生

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程、細(xì)胞工程等相關(guān)知識(shí)，著重識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和PCR技術(shù)的有關(guān)內(nèi)容，意在考查考生的識(shí)記能力和應(yīng)用能力，屬于容易題．