Question

如圖是動(dòng)物細(xì)胞工程過(guò)程中相關(guān)的技術(shù)操作過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：
（1）在操作一中，為了使細(xì)胞彼此分離，通常是先用剪刀剪碎組織，再用消化法將細(xì)胞分開(kāi)，消化法用的消化酶是胰蛋白質(zhì)酶，或膠原酶．研究表明膠原蛋白酶和胰蛋白酶在消化時(shí)的機(jī)制有差異，下表為兩種酶活性的比較表．

項(xiàng)目	胰蛋白酶	膠原酶
消化特性	適用于消化軟組織	適用于消化纖維多的組織
用量	0.01%～0.5%	0.1～0.3mg/ml
消化時(shí)間	0.5～2小時(shí)	1～12小時(shí)
pH	8～9	6.5～7.0
作用強(qiáng)度	強(qiáng)烈	緩和
細(xì)胞影響	時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)有影響	時(shí)間長(zhǎng)時(shí)無(wú)大影響
動(dòng)物血清	有抑制作用	無(wú)抑制作用
Ca2+和Mg2+	有抑制作用	無(wú)抑制作用

據(jù)表中信息可知胰蛋白質(zhì)酶作用時(shí)間需限制在0.5～2小時(shí)，原因是

 

，為了控制胰蛋白酶的消化作用時(shí)間，常用消化臨界時(shí)向溶液中直接加入

 

即可使酶滅活而終止消化．操作一的原理是

 

．
（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液配制好后，通常還要先抽取少許放入培養(yǎng)瓶中，置于37℃、CO₂培養(yǎng)箱中24小時(shí)后觀察，這樣做的目的是

 

．
（3）在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中通常要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)應(yīng)為活細(xì)胞數(shù)．某同學(xué)在細(xì)胞培養(yǎng)的一次測(cè)定中，首先振蕩搖勻培養(yǎng)液并立即吸細(xì)胞懸液少數(shù)向一試管中滴入細(xì)胞懸液9滴，再滴入臺(tái)盼藍(lán)（活細(xì)胞染液）1滴，混勻．再?gòu)脑嚬苤腥』旌弦合蛴?jì)數(shù)板邊緣輕輕滴1～2滴已染色的細(xì)胞懸液，使之充滿(mǎn)計(jì)數(shù)板和蓋玻片之間間隙，經(jīng)測(cè)定計(jì)數(shù)室每小格中活細(xì)胞數(shù)平均為3個(gè)，則原每毫升培養(yǎng)液中含有的活細(xì)胞數(shù)應(yīng)為

 

個(gè)．
（4）科研人員研究發(fā)現(xiàn)某一種抗原刺激機(jī)體后，在鼠體內(nèi)可發(fā)現(xiàn)有多種效應(yīng)B細(xì)胞都可產(chǎn)生針對(duì)于該特定抗原的抗體，這些抗體混合在一起即為多克隆抗體．試從抗原結(jié)構(gòu)的角度分析產(chǎn)生該現(xiàn)象的原因是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：單克隆抗體的制備過(guò)程

專(zhuān)題：

分析：1、胰蛋白酶能分解蛋白質(zhì)，胰蛋白酶作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則細(xì)胞會(huì)被消化掉若時(shí)間太短，消化不充分．
2、由于一個(gè)抗原具有多個(gè)抗原決定簇，所以一種抗原會(huì)刺激產(chǎn)生多種效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生多個(gè)抗體．

解答： 解：（1）若胰蛋白酶作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則細(xì)胞會(huì)被消化掉，若時(shí)間太短，消化不充分．由表格可知，動(dòng)物血清或Ca²⁺和Mg²⁺使胰蛋白酶失活，從而終止消化．
（2）事先觀察配制好的培養(yǎng)液，目的是檢測(cè)培養(yǎng)液是否被污染．
（3）根據(jù)計(jì)算公式3÷（0.1÷400）=X÷（1×10³），求得X=1.2×10⁷，由于其中加入臺(tái)盼藍(lán)染液，所以X值略偏小，即原每毫升培養(yǎng)液中含有的活細(xì)胞數(shù)應(yīng)大于1.2×10⁷
（4）由于一個(gè)抗原具有多個(gè)抗原決定簇，所以一種抗原會(huì)刺激產(chǎn)生多種效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生多個(gè)抗體．
故答案為：
（1）處理時(shí)間太長(zhǎng)，細(xì)胞會(huì)被消化掉，時(shí)間太短，消化不充分（達(dá)不到細(xì)胞分散的目的）　動(dòng)物血清或Ca²⁺和Mg²⁺　細(xì)胞的增殖
（2）檢測(cè)培養(yǎng)液是否被污染
（3）大于1.2×10⁷
（4）一種抗原有多種抗原決定簇

點(diǎn)評(píng)：本題借助于單克隆抗體的制備過(guò)程，考查了考生的識(shí)圖能力，獲取有效信息的能力，難度中等．