Question

11．大腸桿菌菌群數(shù)量是衡量食品安全的一項(xiàng)重要指標(biāo)．下面是檢測食品中大腸菌群的常用方法：稀釋培養(yǎng)測數(shù)法（MPN）．
（一）實(shí)驗(yàn)原理
（1）大腸桿菌菌群是一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的無芽孢桿菌．
（2）乳糖膽鹽發(fā)酵管中溴甲酚紫的作用：用溴甲酚紫作指示劑，該指示劑中性時(shí)呈藍(lán)紫色，酸性時(shí)呈黃色．膽鹽的作用：膽鹽對(duì)很多雜菌有抑制作用，但是對(duì)大腸桿菌不造成影響．
（3）伊紅美藍(lán)能使大腸桿菌菌落呈深紫色．
（二）實(shí)驗(yàn)試劑及器材（略）
（三）實(shí)驗(yàn)過程
（1）檢樣稀釋
①將檢樣25mL放于有225mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液．
②用1mL滅菌吸管吸取1：10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成1：100的稀釋液．按上述操作依次做10倍梯度稀釋液，每稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管．
（2）乳糖發(fā)酵試驗(yàn)
根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)�檢樣污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度，接種3管乳糖膽鹽發(fā)酵管．置于36℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24h，若①，則可報(bào)告為大腸菌群陰性；若②，則可報(bào)告為大腸菌群陽性．
（3）分離培養(yǎng)
將大腸菌群陽性的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在③瓊脂平板上，置36℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24h，然后取出，觀察④．
（4）報(bào)告
根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每100mL（g）大腸菌群的MPN值．
請(qǐng)回答下列問題：
①請(qǐng)把上述空缺步驟補(bǔ)充完整：
①所有發(fā)酵管中溶液呈藍(lán)紫色（或都不產(chǎn)氣）②所有發(fā)酵管中溶液呈黃色（或有產(chǎn)氣者）③伊紅美藍(lán)④菌落顏色
②培養(yǎng)基中必須含有的基本成分是水、無機(jī)鹽、碳源、氮源．
③在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)24h，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格．
④若步驟三采用平板劃線法分離培養(yǎng)大腸桿菌，操作時(shí)，接種環(huán)應(yīng)通過灼燒滅菌，在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次的末端開始劃線．這樣做的目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落．

Answer 1

分析 1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對(duì)pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．
2、鑒別、培養(yǎng)大腸桿菌可使用伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基，菌落呈黑色或紫黑色有金屬光澤．

解答 解：（1）根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理可知，大腸桿菌菌群是一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的無芽孢桿菌，用溴甲酚紫作指示劑，該指示劑中性時(shí)呈藍(lán)紫色，酸性時(shí)呈黃色，如果所有發(fā)酵管中溶液呈藍(lán)紫色，表明溶液呈中性，即說明大腸桿菌不能產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性；如果所有發(fā)酵管中溶液呈黃色，表明溶液呈酸性，說明大腸桿菌能夠產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陽性．
鑒別、培養(yǎng)大腸桿菌可使用伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基，菌落呈黑色或紫黑色有金屬光澤．
（2）培養(yǎng)基中必須含有的基本成分是水、無機(jī)鹽、碳源、氮源．
（3）在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)24h，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格．
④若步驟三采用平板劃線法分離培養(yǎng)大腸桿菌，操作時(shí)，接種環(huán)應(yīng)通過灼燒滅菌，在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次的末端開始劃線．這樣做的目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落．
故答案為：
（1）①所有發(fā)酵管中溶液呈藍(lán)紫色（或都不產(chǎn)氣）②所有發(fā)酵管中溶液呈黃色（或有產(chǎn)氣者） ③伊紅美藍(lán)   ④菌落顏色
（2）水、無機(jī)鹽、碳源、氮源    
（3）檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格
（4）灼燒    將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)步驟，識(shí)記培養(yǎng)基的主要成分，掌握微生物分離與純化的一般方法．