Question

19．有些細菌可分解原油，從而消除有原油泄露造成的土壤污染．某同學(xué)欲從污染的土壤中采用富集培養(yǎng)的方法篩選出高效降解原油的細菌、經(jīng)過的一般步驟是采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離→性能測定，實驗過程如圖13所示，請分析回答：

（1）如圖甲、乙是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，請分析接種的具體方法．

圖A所示的接種方法是稀釋涂布平板法，圖B所示的接種方法是平板劃線法．
（2）在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以原油為唯一碳源的培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（3）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理．現(xiàn)有1L土壤浸出液，用無菌吸管吸取1mL 液樣至盛有9mL無菌水的試管中，依次稀釋10³倍．各取0.1mL已稀釋10³ 倍的水樣分別接種到圖A的三個培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記錄的菌落數(shù)分別為55、56、57，則每升原土壤浸出樣液中菌體數(shù)為5.6×10⁸．
（4）①→③重復(fù)培養(yǎng)的目的是增大分解原油微生物的比例．
（5）為篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍透明帶區(qū)域的大小．一般透明帶區(qū)域越大說明該菌株降解原油的能力越強．
（6）配制培養(yǎng)基時各種成分在溶化后分裝前必須進行pH調(diào)整，接種前要進行高壓蒸汽滅菌，在整個微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在無菌條件下進行．

Answer 1

分析 富集培養(yǎng)技術(shù)實際是一種選擇分離微生物的技術(shù)，其所用培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基．本題是利用生物對特殊碳源的需求，配制特殊的培養(yǎng)基來進行生物的篩選，解答過程中要注意運用無菌操作的一些技術(shù)要求．

解答 解：（1）據(jù)圖分析：圖A中菌落均勻分布，接種方法是稀釋涂布平板法，圖B的接種方法是平板劃線法．
（2）在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以原油為唯一碳源的培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（3）每升原土壤浸出液樣中菌體數(shù)為：（55+56+57）÷3÷0.1×1000×10³=5.6×10⁸ 個．  
（4）經(jīng)過①②③的重復(fù)培養(yǎng)，增大了分解原油微生物的比例．
（5）一般情況下，透明帶區(qū)域越大說明該菌株的降解對羥基苯甲酸的能力越強．
（6）培養(yǎng)基制作完成后，需要進行高壓蒸汽滅菌法滅菌．在整個微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在無菌條件下進行．
故答案為：
（1）稀釋涂布平板法   平板劃線法
（2）土壤樣品稀釋液   原油    選擇
（3）5.6×10⁸
（4）增大分解原油微生物的比例
（5）越強
（6）高壓蒸汽滅菌    無菌

點評 本題主要考查目的微生物的篩選與培養(yǎng)，意在強化學(xué)生對目的微生物的篩選過程的理解與運用．