Question

5．科學(xué)家發(fā)現(xiàn)家蠅體內(nèi)存在一種抗腫瘤蛋白（且具有抗菌能力）．這種蛋白質(zhì)具有極強(qiáng)的抗菌能力，受到研究者重視．若臨床使用發(fā)現(xiàn)此蛋白質(zhì)對腫瘤確有良好的療效，可以通過基因工程技術(shù)導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)進(jìn)行大量生產(chǎn)．其過程大體如下圖甲：

（1）在基因工程中，獲取目的基因的方法有（至少寫出兩種）人工合成、PCR擴(kuò)增．
（2）酶切此家蠅DNA分子和酶切細(xì)菌質(zhì)粒時，所用的限制酶可以不同，但是產(chǎn)生的粘性末端要滿足粘性末端能完全互補(bǔ)條件．
（3）將抗腫瘤基因?qū)�入大腸桿菌，并在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)產(chǎn)生了抗腫瘤蛋白，由于繁殖快、產(chǎn)量較高，因此在短時間內(nèi)就能獲得大量的抗腫瘤蛋白．
（4）細(xì)胞工程也可以將抗腫瘤蛋白臨床使用，上圖乙是單克隆抗體制備過程示意圖，請據(jù)圖回答：
①圖中A過程從小鼠的脾臟中取得的“小鼠細(xì)胞”是B淋巴（漿）細(xì)胞，要獲得能產(chǎn)生抗腫瘤蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞至少要經(jīng)過2次篩選．從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，給小鼠注射的特定的物質(zhì)是（特異性）抗原．
②圖中B過程是細(xì)胞融合，該過程需要用滅活的病毒（或仙臺病毒）、聚乙二醇或電激等誘導(dǎo)．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．

解答 解：（1）在基因工程中，獲取目的基因的方法有從基因文庫中獲取目的基因、PCR擴(kuò)增目的基因、人工合成目的基因．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，需要DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接起來，所以兩者需要相同的黏性末端且能完全互補(bǔ)．
（3）選用大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是：繁殖速度快，可以在短時間內(nèi)獲得要表達(dá)的蛋白質(zhì)．
（4）①單克隆抗體的制備過程中，采用的是已免疫的小鼠B細(xì)胞（漿細(xì)胞或效應(yīng)B細(xì)胞），即經(jīng)過注射特異性抗原，然后和骨髓瘤細(xì)胞的融合，需要經(jīng)過至少兩次篩選（第一次篩選獲得雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選獲得能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞），最終篩選出來的雜交瘤細(xì)胞．
②圖中B過程是細(xì)胞融合，該過程需要用滅活的病毒、聚乙二醇或電激等誘導(dǎo)．
故答案為：
（1）人工合成   PCR擴(kuò)增          
（2）粘性末端能完全互補(bǔ)
（3）繁殖快、產(chǎn)量較高
（4）①B淋巴（漿）   2     （特異性）抗原 ②病毒（或仙臺病毒）

點評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程和細(xì)胞工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的操作步驟，掌握各步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識記單克隆抗體的制備過程，能結(jié)合圖解準(zhǔn)確答題．