Question

2012年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎(jiǎng)授予英國(guó)科學(xué)家約翰?戈登和日本科學(xué)家山中伸彌．約翰?戈登在20世紀(jì)60年代做過(guò)一個(gè)劃時(shí)代的實(shí)驗(yàn)：把美洲爪蟾的小腸上皮細(xì)胞核注入去核的卵細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)一部分卵依然可以發(fā)育成蝌蚪，其中的一部分蝌蚪可以繼續(xù)發(fā)育成為成熟的爪蟾．山中伸彌等科學(xué)家將四個(gè)關(guān)鍵基因轉(zhuǎn)入小鼠的成纖維細(xì)胞，使其變成多功能干細(xì)胞（iPS），這些干細(xì)胞可再轉(zhuǎn)化成老鼠體內(nèi)任何種類的細(xì)胞．回答下列問(wèn)題
（1）動(dòng)物體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植，其原因是

 

．
（2）從卵巢中吸取的卵母細(xì)胞，一般要培養(yǎng)到

 

階段才能用于實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中要用微型吸管吸出

 

與卵母細(xì)胞的

 

；從供體動(dòng)物取出體細(xì)胞后，通過(guò)

 

技術(shù)將供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞，通過(guò)病毒介導(dǎo)或者

 

（物理）等方式使兩個(gè)細(xì)胞融合，供體細(xì)胞進(jìn)入受體卵母細(xì)胞內(nèi)構(gòu)建重組胚胎．當(dāng)胚胎發(fā)育到

 

階段時(shí)，將胚胎移入受體（代孕）動(dòng)物體內(nèi)．
（3）在山中伸彌的實(shí)驗(yàn)中，利用了逆轉(zhuǎn)錄病毒，該病毒的作用是

 

．
（4）一般情況下，體外擴(kuò)增目的基因常用的方法是

 

．在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到細(xì)胞表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增值，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的

 

．要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來(lái)，需要用

 

處理．

Answer 1

考點(diǎn)：動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù),基因工程的原理及技術(shù),胚胎移植

專題：

分析：基因工程中載體有質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程：取動(dòng)物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
動(dòng)物核移植是指將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎．在體外將采集到的卵母細(xì)胞培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期才成熟，可以通過(guò)顯微操作技術(shù)去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核和第一極體，核移植時(shí)，對(duì)提供細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的奶牛不需要進(jìn)行同期發(fā)情處理，使用電脈沖等方法可以激活重組細(xì)胞使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育．

解答： 解：（1）胚胎細(xì)胞核移植容易成功的原因是胚胎細(xì)胞分化程度低，全能性較高．
（2）從卵巢中吸取的卵母細(xì)胞，一般要培養(yǎng)到 MⅡ時(shí)期才能用于實(shí)驗(yàn)，用微型吸管吸出 第一極體與卵母細(xì)胞的 細(xì)胞核；通過(guò)顯微注射技術(shù)將供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞，通過(guò)病毒介導(dǎo)或者 電脈沖（或電刺激）等方式使兩個(gè)細(xì)胞融合．胚胎發(fā)育到 桑椹胚或囊胚階段時(shí)可進(jìn)行胚胎移植．
（3）基因工程中，病毒可用作目的基因的載體．
（4）體外擴(kuò)增基因的方法是PCR技術(shù)，在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到細(xì)胞表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增值，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的 接觸抑制．要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來(lái)，需要用 胰蛋白酶處理．
故答案為：
（1）胚胎細(xì)胞分化程度低，全能性較高
（2）MⅡ中期（減數(shù)分裂第二次分裂中期）   第一極體   細(xì)胞核   顯微注射     電脈沖（或電刺激）   桑椹胚或囊胚
（3）目的基因的載體
（4）PCR技術(shù)（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）  接觸抑制    胰蛋白酶

點(diǎn)評(píng)：本題考查動(dòng)物細(xì)胞工程，要求學(xué)生識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的具體過(guò)程，理解核移植操作過(guò)程，能把握知識(shí)間的聯(lián)系形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)．