Question

回答下列有關(guān)基因工程的問(wèn)題：
（1）獲取目的基因時(shí)，可從基因文庫(kù)中直接提取，而基因文庫(kù)包括

 

和

 

，其中要用到反轉(zhuǎn)錄技術(shù)的是

 

．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，用限制酶Ⅰ切割質(zhì)粒運(yùn)載體可產(chǎn)生“

CGATATCG…C C…GCTATAGC

”的片段，該限制酶識(shí)別的核苷酸序列是

 

，用限制酶Ⅱ切割含有目的基因的DNA，兩種酶切割DNA產(chǎn)生的末端能拼接到一起，則限制酶Ⅱ必須具有

 

的特點(diǎn)．作為一個(gè)完整的基因表達(dá)載體，必須具備啟動(dòng)子、

 

（至少答出兩種）等．其中啟動(dòng)子是

 

識(shí)別和結(jié)合的部位．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞時(shí)，如果受體細(xì)胞是水稻（單子葉植物）細(xì)胞，則常用的方法是

 

；如果受體細(xì)胞是大腸桿菌，則需要用鈣離子處理，處理后的細(xì)胞具有

 

的特點(diǎn)．
（4）檢測(cè)與鑒定目的基因時(shí)，檢測(cè)目的基因在真核細(xì)胞中能否穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：基因工程過(guò)程包括目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞和目的基因的檢測(cè)與鑒定．
獲取目的基因的方法主要有兩種：
（1）從供體細(xì)胞的DNA中直接分離基因，最常用的方法是“鳥(niǎo)槍法”又叫“散彈射擊法“；
（2）人工合成基因，這種方法有兩條途徑，一是以目的基因轉(zhuǎn)錄的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，再在酶的作用下合成雙鏈DNA，即目的基因；另一條途徑是蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測(cè)出信使RNA序列，再推測(cè)出結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，然后用化學(xué)的方法以單核苷酸為原料合成．
限制酶具有特異性：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．形成黏性末端和平末端兩種．
將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．
（1）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；
（2）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；
（3）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法（Ca²⁺處理法）．

解答： 解：（1）獲取目的基因時(shí)，可從基因文庫(kù)中直接提取，而基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)，其中要用到反轉(zhuǎn)錄技術(shù)的是部分基因文庫(kù)．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，限制酶Ⅰ識(shí)別的核苷酸序列是-CGATATCG-．用限制酶Ⅱ切割含有目的基因的DNA，兩種酶切割DNA產(chǎn)生的末端能拼接到一起，則限制酶Ⅱ必須具有切割產(chǎn)生的粘性末端和限制酶Ⅰ切割產(chǎn)生的粘性末端相同的特點(diǎn)．一個(gè)完整的基因表達(dá)載體包括：目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因．目的基因是外源基因，是基因表達(dá)載體的必須組成；啟動(dòng)子是基因表達(dá)載體的必須組成，是RNA聚合酶的識(shí)別位點(diǎn)；標(biāo)記基因的作用是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)；終止子是基因表達(dá)載體的必須組成，能終止轉(zhuǎn)錄過(guò)程．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞時(shí)，如果受體細(xì)胞是水稻（單子葉植物）細(xì)胞，則常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；如果受體細(xì)胞是大腸桿菌，則需要用鈣離子處理，處理后的細(xì)胞具有吸收周圍環(huán)境中的DNA分子的特點(diǎn)．
（4）檢測(cè)與鑒定目的基因時(shí)，檢測(cè)目的基因在真核細(xì)胞中能否穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體DNA上．
故答案為：
（1）基因組文庫(kù)     部分基因文庫(kù)     部分基因文庫(kù)
（2）-CGATATCG-切割產(chǎn)生的粘性末端和限制酶Ⅰ切割產(chǎn)生的粘性末端相同    標(biāo)記基因、終止子   RNA聚合酶
（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法    吸收周圍環(huán)境中的DNA分子
（4）目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體DNA上

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、工具及操作步驟，掌握獲取目的基因的幾種方法，能根據(jù)題干要求準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)，屬于考綱識(shí)記層次的考查．