Question

8．羊奶中乳白蛋白含量很低，科研人員嘗試?yán)�用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將人乳白蛋白基因?qū)�入羊胚胎的成纖維細(xì)胞核，進(jìn)而培育轉(zhuǎn)基因克隆山羊．技術(shù)流程如下圖，據(jù)圖回答：

（1）圖中①過(guò)程中使用的酶有限制酶、DNA連接酶．
（2）圖中②過(guò)程使用的方法是顯微注射技術(shù)．將導(dǎo)入成功的細(xì)胞核注入到③去核卵母細(xì)胞（必須體現(xiàn)出無(wú)核）構(gòu)成重組細(xì)胞，培養(yǎng)成早期胚胎，經(jīng)圖中④胚胎移植技術(shù)可培育成轉(zhuǎn)基因克隆山羊．
（3）與預(yù)期結(jié)果相反，轉(zhuǎn)基因克隆山羊的乳汁中乳白蛋白含量依然很低．為探究其原因，研究人員從（轉(zhuǎn)基因克隆山羊）乳腺細(xì)胞細(xì)胞中提取總RNA，然后以同位素標(biāo)記的含有人乳白蛋白基因的DNA片段作為探針進(jìn)行分子雜交，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒(méi)有出現(xiàn)雜交帶．
（4）研究人員對(duì)上述現(xiàn)象的解釋?zhuān)嚎赡苡捎谌巳榘椎鞍谆�因首端（首端、尾端）無(wú)啟動(dòng)子，從而不能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄．推測(cè)要使該基因在山羊乳腺細(xì)胞中表達(dá)，須將它與山羊乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組起來(lái)，構(gòu)建基因表達(dá)載體．

Answer 1

分析 分析圖解可知，圖中過(guò)程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，過(guò)程②表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，③表示去核的卵母細(xì)胞，過(guò)程④表示胚胎移植．

解答 解：（1）圖中①過(guò)程表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，該過(guò)程需要首先使用限制酶切割目的基因和運(yùn)載體形成相同的黏性末端，然后再利用DNA連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒．
（2）一般將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞運(yùn)用顯微注射技術(shù)．將導(dǎo)入成功的細(xì)胞核注入到③去核卵母細(xì)胞構(gòu)成重組細(xì)胞，培養(yǎng)成早期胚胎，經(jīng)圖中④胚胎移植技術(shù)可培育成轉(zhuǎn)基因克隆山羊．
（3）與預(yù)期結(jié)果相反，轉(zhuǎn)基因克隆山羊的乳汁中乳白蛋白含量依然很低．為探究其原因，可以從（轉(zhuǎn)基因克隆山羊）乳腺細(xì)胞細(xì)胞中提取總RNA，然后以同位素標(biāo)記的含有人乳白蛋白基因的DNA片段作為探針進(jìn)行分子雜交，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒(méi)有出現(xiàn)雜交帶．
（4）轉(zhuǎn)基因克隆山羊的乳汁中乳白蛋白含量依然很低，可能由于人乳白蛋白基因首端無(wú)啟動(dòng)子，從而不能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄．推測(cè)要使該基因在山羊乳腺細(xì)胞中表達(dá)，須將它與山羊乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組起來(lái)，構(gòu)建基因表達(dá)載體．
故答案為：
（1）限制酶、DNA連接酶 
（2）顯微注射技術(shù)      去核卵母細(xì)胞（必須體現(xiàn)出無(wú)核）     胚胎移植
（3）（轉(zhuǎn)基因克隆山羊）乳腺細(xì)胞       同位素標(biāo)記的含有人乳白蛋白基因的DNA片段
（4）首端    山羊乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子

點(diǎn)評(píng) 本題以轉(zhuǎn)基因克隆山羊的培育過(guò)程為載體，考查了基因工程的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記基因工程的工具和操作步驟，識(shí)記基因表達(dá)載體的組成，明確啟動(dòng)子和終止子在基因中的位置以及其生理作用．