Question

13．如圖圖一是利用基因工程生產(chǎn)人胰島素的主要流程圖，圖二是生產(chǎn)過(guò)程中所制備的帶有目的基因供體DNA分子及載體（質(zhì)粒）的示意圖．箭頭所指為相應(yīng)限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)，Tet^r表示四環(huán)素抗性基因，Tet^r上游有基因C，只有存在基因C的表達(dá)產(chǎn)物時(shí)Tet^r基因才能表達(dá)．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）圖一中的供體細(xì)胞是人的某種體細(xì)胞．
（2）圖一中第②步中需要的酶是反轉(zhuǎn)錄酶（逆轉(zhuǎn)錄酶），第③步中需要的工具酶是限制酶和DNA連接酶，第④步常用鈣離子處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于容易吸收周圍DNA的感受態(tài)．
（3）若圖一所示過(guò)程中以Tet^r為標(biāo)記基因，則第③步中應(yīng)選用SmaⅠ和PstⅠ對(duì)供體DNA和質(zhì)粒進(jìn)行切割；為檢測(cè)轉(zhuǎn)化結(jié)果，將經(jīng)第④步處理后的大腸桿菌培養(yǎng)液接種到含有四環(huán)素培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出的菌落就是成功插入目的基因的菌落．
（4）檢測(cè)目的基因能否在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)，常用的方法為抗原-抗體雜交法．

Answer 1

分析 圖一是利用基因工程生產(chǎn)人胰島素過(guò)程，①過(guò)程獲取的單鏈核酸是RNA，②是逆轉(zhuǎn)錄獲得DNA過(guò)程，③是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，④是利用Ca²⁺轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入農(nóng)桿菌，⑤是將農(nóng)桿菌侵染煙草細(xì)胞，⑥是植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植株．

解答 解：（1）分析圖解可以看出，圖一中的供體細(xì)胞是人的某種體細(xì)胞．
（2）圖一中第②步表示逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，該過(guò)程需要逆轉(zhuǎn)錄酶，基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程中需要限制酶和DNA連接酶，第④步常用鈣離子處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于容易吸收周圍DNA的感受態(tài)．
（3）只有存在基因C的表達(dá)產(chǎn)物時(shí)Tet^r基因才能表達(dá)，因此若圖一所示過(guò)程中以Tet^r為標(biāo)記基因，則第③步中應(yīng)選用SmaⅠ和PstⅠ對(duì)供體DNA和質(zhì)粒進(jìn)行切割，這樣可以保證C基因的正常表達(dá)；標(biāo)記基因是四環(huán)素抗性基因，所以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌．
（4）檢驗(yàn)?zāi)康幕�因在煙草�?xì)胞中是否成功表達(dá)的方法是抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）人的某種體細(xì)胞       
（2）反轉(zhuǎn)錄酶（逆轉(zhuǎn)錄酶）  限制酶和DNA連接酶   感受
（3）SmaⅠ和PstⅠ四環(huán)素     
（4）抗原-抗體雜交法

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程，解題關(guān)鍵：①理解基因工程操作過(guò)程．②能理解題意“基因C”的作用和 基因表達(dá)載體的構(gòu)建方法．