Question

人外周血單核細胞能合成白介素2（IL-2），是含有113個氨基酸殘基的糖蛋白，該蛋白可增強機體免疫功能，但在體內(nèi)易被降解．研究人員將IL-2基因與人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一個融合基因，并在受體細胞中表達，獲得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白．其技術(shù)流程如圖．請回答：
（1）培養(yǎng)人外周血單核細胞時，需要通入

 

（氣體）；圖中②表示

 

過程．
（2）位點a應(yīng)能被

 

限制酶切割．為了使融合基因能夠完整表達出所需產(chǎn)物，應(yīng)將表達載體2導(dǎo)入的受體細胞是

 

（填大腸桿菌或酵母菌）．
（3）檢測工程菌是否合成了IL-2-HSA融合蛋白，應(yīng)采用

 

方法．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：①表示從人的外周學(xué)細胞去mRNA；②表示以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA的過程；③表示基因表達載體的構(gòu)建過程，需要限制酶和DNA連接酶．目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達載體1也必須有這兩個酶切位點，而表達載體1上已有EcoRⅠ，因此位點a應(yīng)含有BglⅡ．

解答： 解：（1）動物細胞培養(yǎng)所需要的條件是：95%空氣和5%CO₂氣體環(huán)境、適宜溫度（37℃）和PH、無毒無菌的環(huán)境及合適的營養(yǎng)成分，其培養(yǎng)基中通常需加入血清、血漿等一些天然成分；圖中②mRNA→cDNA，表示逆轉(zhuǎn)錄過程．
（2）目的基因IL-2cDNA和表達載體1在構(gòu)建表達載體2時需先用限制酶切割讓二者獲得相同的黏性末端，然后在DNA連接酶的作用下重新組合．根據(jù)目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達載體1也必須有這兩個酶切位點，而表達載體1上已有EcoRⅠ，因此位點a應(yīng)被BglⅡ限制酶切割．
（3）應(yīng)用抗原-抗體雜交技術(shù)可檢測酵母菌是否表達出IL-2-HSA融合蛋白．
故答案為：
（1）O₂和CO₂   逆轉(zhuǎn)錄   
（2）BglⅡ酵母菌
（3）抗原-抗體雜交

點評：本題結(jié)合流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生能夠識記動物細胞培養(yǎng)的條件；掌握限制酶的作用特點；識記目的基因分子水平檢測的方法等．