Question

【題目】人的T細胞可以產生某種具有臨床價值的蛋白質（Y）。該蛋白質由一條多肽鏈組成。目前可以利用現(xiàn)代生物技術生產Y�；卮鹣铝袉栴}。

（1）若要獲得Y的基因，可從人的T細胞中提取_____________作為模板，在_____________催化下合成cDNA。再利用_____________技術在體外擴增獲得大量Y的基因。

（2）將目的基因導入植物細胞常用的方法是_____________，將上述所得Y的基因插入_____________中，得到含目的基因的重組Ti質粒，則可用該轉化法將該基因導入某種植物的葉肉細胞中。若該葉肉細胞經_____________得到了能穩(wěn)定表達Y的愈傷組織，則說明Y的基因已經_____________。

（3）天然的Y通常需要在低溫條件下保存。假設將Y的第6位氨基酸甲改變?yōu)榘被�酸乙可提高其熱穩(wěn)定性，若要根據(jù)蛋白質工程的原理對Y進行改造以提高其熱穩(wěn)定性，具體思路是_____________。

Answer 1

【答案】mRNA 逆轉錄酶 PCR 農桿菌轉化法 T-DNA 脫分化 整合到葉肉細胞染色體DNA上 找到第6位氨基酸中的堿基所在的基因位置，參照密碼子表，將第6位氨基酸甲的堿基替換為氨基酸乙的堿基

【解析】

基因工程的操作步驟：獲取目的基因（基因文庫獲取、PCR、人工合成等）；構建基因表達載體（含目的基因、標記基因、啟動子、終止子、復制原點）；把目的基因導入受體細胞（動物—顯微注射法；植物—農桿菌轉化法、基因槍法、花粉管通道法；微生物—鈣離子處理法）；目的基因的檢測和鑒定（分子水平和個體水平）。

（1）由于人的T細胞可以產生蛋白質Y，要獲得Y的基因，可從人的T細胞中提取mRNA作為模板，在逆轉錄酶催化下，利用四種游離的脫氧核苷酸合成cDNA，再利用PCR技術（體外擴增DNA的技術）在體外擴增獲得大量Y的基因。

（2）將目的基因導入植物細胞常用的方法是農桿菌轉化法。農桿菌轉化法中，T-DNA可以攜帶目的基因轉移至受體細胞，并整合到受體細胞的的染色體DNA上，故需要Y的基因插入農桿菌Ti質粒上的T-DNA中得到含目的基因的重組Ti質粒，把含目的基因的重組Ti質粒導入到農桿菌中，再讓含目的基因的農桿菌侵染植物的葉肉細胞。若該葉肉細胞經脫分化得到了能穩(wěn)定表達Y的愈傷組織，則說明Y的基因已經整合到葉肉細胞染色體DNA上。

（3）蛋白質工程需要從預期的蛋白質的功能出發(fā)，設計預期的蛋白質結構，推出相應的氨基酸序列，找到相應的脫氧核苷酸序列，故對Y進行改造以提高其熱穩(wěn)定性，需要找到第6位氨基酸中的堿基所在的基因位置，參照密碼子表，將第6位氨基酸甲的堿基替換為氨基酸乙的堿基。