Question

11．幽門螺桿菌是棲息在胃粘膜的革蘭氏陰性螺旋狀桿菌，具有強的脲酶（能降解尿素）活性，其代謝類型屬于異養(yǎng)厭氧型（氧氣濃度在5%〜8%左右適合，完全無氧或空氣環(huán)境中無法生存），這種細菌是慢性胃炎、甚至胃癌發(fā)生的元兇．
（1）為了對胃炎患者的胃粘膜提取物稀釋樣液中幽門螺桿菌進行分離，應(yīng)將樣品稀釋液接種于以尿素為唯一氮源的固體選擇培養(yǎng)基上，接種后的培養(yǎng)皿在氧氣濃度在5%-8%左右條件下，倒置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)．
（2）分離培養(yǎng)幽門螺桿菌時必須進行無菌操作，包括培養(yǎng)基和各種器皿都必須是無菌的，培養(yǎng)基常用的滅菌方法有干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌．
（3）欲檢測上述培養(yǎng)基中是否具有幽門螺桿菌這類細菌的存在，向培養(yǎng)基中添加酚紅指示劑，培養(yǎng)基中菌落周圍顯示紅色環(huán)帶，即表明這類細菌的存在，這種檢測過程的機理是脲酶將培養(yǎng)基中的尿素分解成氨，該物質(zhì)的水溶液會使酚紅指示劑呈現(xiàn)紅色．
（4）采用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)幽門螺桿歯菌，為了測定菌液中的菌體數(shù)量，一般采用稀釋涂布平板法將一定量的菌液接種到固體培養(yǎng)基上，統(tǒng)計菌落的數(shù)量來代表菌體數(shù)，這種檢測方法測得的結(jié)果一般偏�。ㄌ睢按蟆被颉靶　保�，原因是有些活菌在培養(yǎng)過程中死亡、有些菌落是由多個活菌共同形成的．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．
2、消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

3、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學(xué)藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

解答 解：（1）幽門螺桿菌具有強的脲酶（能降解尿素）活性，因此分離該菌時應(yīng)將樣品稀釋液接種于以尿素為唯一氮源的固體選擇培養(yǎng)基上；由于幽門螺桿菌代謝類型屬于異養(yǎng)厭氧型（氧氣濃度在5%〜8%左右適合，完全無氧或空氣環(huán)境中無法生存），因此接種后的培養(yǎng)皿在氧氣濃度在5%-8%左右條件下，倒置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)．
（2）培養(yǎng)基常用的滅菌方法有干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌．
（3）欲檢測上述培養(yǎng)基中是否具有幽門螺桿菌這類細菌的存在，向培養(yǎng)基中添加酚紅指示劑，培養(yǎng)基中菌落周圍顯示紅色環(huán)帶，即表明這類細菌的存在，這種檢測過程的機理是脲酶將培養(yǎng)基中的尿素分解成氨，該物質(zhì)的水溶液會使酚紅指示劑呈現(xiàn)紅色．
（4）接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可用于測定菌液中的菌體數(shù)量，即采用稀釋涂布平板法將一定量的菌液接種到固體培養(yǎng)基上，統(tǒng)計菌落的數(shù)量來代表菌體數(shù)；由于有些活菌在培養(yǎng)過程中死亡、有些菌落是由多個活菌共同形成的，因此這種檢測方法測得的結(jié)果一般偏�。�
故答案為：
（1）尿素       氧氣濃度在5%-8%左右
（2）干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
（3）脲酶將培養(yǎng)基中的尿素分解成氨，該物質(zhì)的水溶液會使酚紅指示劑呈現(xiàn)紅色
（4）稀釋涂布平板      菌落           小      有些活菌在培養(yǎng)過程中死亡、有些菌落是由多個活菌共同形成的

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記接種微生物常用的兩種方法；識記無菌技術(shù)；識記分離能分解尿素的微生物的原理，再結(jié)合題中信息準確答題．