Question

19．為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上轉運肽的基因相連，導入油菜葉片細胞并獲得了轉基因油菜品種．

（1）如圖，選用圖中的限制酶ClaⅠ處理兩個基因后再用DNA連接酶酶處理，得到A和D（填圖中字母）端相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入右圖所示Ti質粒的T-DNA中，構建基因表達載體并導入農桿菌中．
（3）將獲得的農桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，得到用于轉化的浸染液．
（4）利用農桿菌轉化法法將目的基因導入油菜葉片中，并通過篩選獲得轉基因油菜細胞，通過植株組織培養(yǎng)技術可培育成轉基因油菜植株．

Answer 1

分析 基因文庫包括cDNA文庫、基因組文庫等．某個群體包含一種生物所有的基因的文庫叫基因組文庫，而用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉錄產生的多種互補DNA片段屬于cDNA文庫．

解答 解：（1）兩個基因都含有ClaⅠ限制酶識別位點，因此可以用ClaⅠ限制酶切割處理兩個基因后，再用DNA連接酶鏈接，得到A、D端相連的融合基因．
（2）Ti質粒的T-DNA可以轉移到受體細胞的染色體上，穩(wěn)定遺傳，因此，將上述融合基因插入右圖所示Ti質粒的T-DNA中，構建表達載體即重組質粒并導入農桿菌中．
（3）重組質粒中含有四環(huán)素抗性基因，可以篩選出含有轉基因的菌落，因此，將獲得的農桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的浸染液．
（4）受體細胞是植物細胞，此過程常用利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞．該細胞再通過植物組織培養(yǎng)技術，可培育成轉基因油菜植株．
故答案為：
（1）ClaⅠDNA連接酶  A和D
（2）T-DNA   基因表達載體
（3）四環(huán)素
（4）農桿菌轉化法  植株組織培養(yǎng)

點評 本題以增加油菜種子的含油量為材料背景，考查基因工程的相關知識，意在考查學生的識圖能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題和解決問題的能力．