Question

12．根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)回答下列問題．
（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，需要加入兩種引物，原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈，用兩種引物才能確保DNA兩條鏈同時(shí)被擴(kuò)增，引物I延伸而成的DNA單鏈會(huì)與引物Ⅱ結(jié)合，進(jìn)行DNA的延伸，這樣，DNA聚合酶只能特異地復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的DNA序列的DNA序列，一個(gè)DNA分子三輪復(fù)制以后，含有兩種引物的DNA分子有6個(gè)．
（2）基因工程的核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體．其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，表達(dá)和發(fā)揮作用，并可遺傳給下代．
（3）大腸桿菌作為受體細(xì)胞最常用的轉(zhuǎn)化方法是：首先用Ca²⁺處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞．
（4）檢測(cè)目的基因是否發(fā)揮功能作用的第一步是目的基因是否能轉(zhuǎn)錄形成mRNA．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，由于DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈，因此要用兩種引物才能確保DNA兩條鏈同時(shí)被擴(kuò)增；引物I延伸而成的DNA單鏈會(huì)與引物Ⅱ結(jié)合，進(jìn)行DNA的延伸，這樣，DNA聚合酶只能特異地復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的DNA序列；一個(gè)DNA分子三輪復(fù)制以后，含有兩種引物的DNA分子有2³-2=6個(gè)．
（2）基因工程的核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體，其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，表達(dá)和發(fā)揮作用，并可遺傳給下代．
（3）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常用感受態(tài)細(xì)胞法，即用Ca²⁺處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞．
（4）檢測(cè)目的基因是否發(fā)揮功能作用的第一步是目的基因是否能轉(zhuǎn)錄形成mRNA．
故答案為：
（1）DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈，用兩種引物才能確保DNA兩條鏈同時(shí)被擴(kuò)增      處于兩個(gè)引物之間       6
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體       穩(wěn)定存在，表達(dá)和發(fā)揮作用
（3）感受態(tài)
（4）目的基因是否能轉(zhuǎn)錄形成mRNA

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的概念、原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．