Question

9．如表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，如圖中標注了在某質粒及某DNA片段上相關限制酶的酶切位點，請回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	BcIⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識別序列及切 割位點	↓ GGATCC CCTAGG ↑	↓ TGATCA ACTAGT ↑	↓ GATC CTAG ↑	↓ AAGCTT TTCGAA ↑

（1）根據表中信息，Sau3AⅠ在該質粒上有3個酶切位點．在將圖中質粒和目的基因構建成重組質粒進程中，應從表中選用的兩種限制酶是BclⅠ和HindⅢ．
（2）若將BamHⅠ酶切的DNA末端與BcIⅠ酶切的DNA末端連接，對于該連接部位B
A．BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都能切開         B．BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都不能切開
C．BamHⅠ酶能切開，BcIⅠ酶不能切      D．BamHⅠ酶不能切開，BcIⅠ酶能切開
（3）酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶作用后可形成重組質粒．若將該重組質粒導入大腸桿菌需用氯化鈣處理大腸桿菌，為了篩選出含有重組質粒的大腸桿菌，應在培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．

Answer 1

分析 解答本題的關鍵在于理解重組質粒中標記基因的作用．選擇限制酶需注意插入目的基因時不能破壞標記基因．
根據題意和圖示分析可知：在質粒上存在BamH I、BclⅠ、BamH I和HindⅢ等四個酶切位點，其中BamH I的切割位點在兩個抗性基因上都有，而抗性基因為載體的標記基因，因此不可用該酶切割．在目的基因上，BclⅠ、BamH I、HindⅢ和Sau3AⅠ四種酶也存在酶切位點．

解答 解：（1）由于BclⅠ和HindⅢ識別序列都包含了Sau3AⅠ識別序列，所以Sau3A I在質粒上有三個酶切位點．由于BamHⅠ和Sau3A I會破壞質粒中的兩個抗性基因，不利于后期的篩選，所以應選用限制酶為BclⅠ和HindⅢ．
（2）BamHⅠ的識別序列為$\frac{\underline{\;GGATCC\;}}{CCTAGG}$，BclⅠ酶的識別序列為$\frac{\underline{\;TGATCA\;}}{ACTAGT}$，兩種酶切割后被DNA連接酶連接，堿基序列為$\frac{\underline{\;GGATCA\;}}{CCTAGT}$，不滿足這兩種限制酶對識別序列的特異性要求，所以不能再被這兩種限制酶切割．
（3）酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶作用后可形成重組質粒．若將該重組質粒導入大腸桿菌需用氯化鈣處理大腸桿菌，使之變?yōu)楦惺軕B(tài)．為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．
故答案為：
（1）3   BclⅠ和 HindⅢ
（2）B 
（3）DNA連接    氯化鈣   四環(huán)素

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關細節(jié)，能結合所學的知識準確答題，屬于考綱應用和理解層次的考查．