Question

(9分)小立碗蘚是一種苔蘚植物，易培養(yǎng)，被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，又因其同源重組的效率很高，已成為研究基因功能的良好材料。請回答下列問題：

(1) 甲同學(xué)在使用高倍鏡觀察小立碗蘚的葉綠體時，發(fā)現(xiàn)在適宜條件下細(xì)胞中的葉綠體長時間靜止不動，最可能的原因是__________________________。

(2) 乙同學(xué)用小立碗蘚進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)操作：

步驟一：在潔凈的載玻片中央加一滴清水，放置一片小立碗蘚的小葉，蓋上蓋玻片。

步驟二：從蓋玻片一側(cè)滴入0.3 g/mL的蔗糖溶液，在蓋玻片的另一側(cè)________，這樣重復(fù)幾次。

步驟三：在顯微鏡下觀察，若發(fā)現(xiàn)葉綠體向細(xì)胞中間聚攏，說明____。

(3) 同源重組在細(xì)胞中可自然發(fā)生，交叉互換的位點(diǎn)必須發(fā)生在特定的同源序列中，原理如圖1所示。已知由硫酸鹽降解酶(K基因編碼)催化某種硫酸鹽(APS)的降解是高等植物中硫酸鹽利用的關(guān)鍵步驟。有人提出，植物體中還存在著該硫酸鹽降解的支路(PAPS)，但不能確定其相關(guān)酶是否在植物體中存在�？蒲腥藛T利用小立碗蘚進(jìn)行了以下研究：

圖1 圖2

① 測定K基因兩側(cè)的堿基序列。若測得在序列“5′…CGACCCGGGAGT…3′”中含有一個6個堿基對的限制酶SmaⅠ的識別序列，可推知該酶的識別序列為________。

② 質(zhì)粒pcDNA3上有Neo基因(新霉素抗性基因)和限制酶Sma Ⅰ、Tth11 Ⅰ和Bsm Ⅰ的酶切位點(diǎn)，如圖2所示。為了使Neo基因能與K基因發(fā)生同源重組，應(yīng)選用限制酶________將Neo基因從質(zhì)粒上切下來，然后在該基因的兩側(cè)增加與K基因兩側(cè)相同的________，構(gòu)建具有Neo基因的表達(dá)載體。

③ 制備小立碗蘚的原生質(zhì)體，將其放在________溶液中，利用聚乙二醇介導(dǎo)直接將Neo基因表達(dá)載體導(dǎo)入小立碗蘚細(xì)胞內(nèi)。

④ 在添加了________的培養(yǎng)基中培養(yǎng)上述小立碗蘚細(xì)胞，若能夠發(fā)育成完整的植物體，則表明該植株已沒有K基因。若通過此轉(zhuǎn)化途徑得到的植株________，說明在小立碗蘚中存在PAPS支路。

Answer 1