Question

13．自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的．人們?cè)谘芯课⑸�物時(shí)一般要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定．下面是有關(guān)土壤中分解尿素的細(xì)菌分離和計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題．
（1）為分離出土壤中分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該用尿素作為唯一的氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行分離，這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基（按功能分類）．也可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑對(duì)該類微生物鑒別．
（2）若取土樣5g，應(yīng)加入45mL的無(wú)菌水配制成稀釋10倍土壤溶液．因土壤中細(xì)菌密度很大，需要不斷加以稀釋，配制成10¹～10⁷不同濃度的土壤溶液．將10³～10⁷倍的稀釋液分別吸取0.1mL加入到固體培養(yǎng)基上，用涂布器將菌液鋪平，每個(gè)稀釋度下至少涂布3個(gè)平板．這種接種方法稱為稀釋涂布平板法．
（3）將接種的培養(yǎng)皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h，觀察并統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，結(jié)果如表，其中10⁵倍的稀釋比較合適，由此計(jì)算出每克土壤中的菌落數(shù)為4.96×10⁷．這種方法測(cè)定的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低（低/高）．

稀釋倍數(shù)	103	104	105	106	107
平均菌落數(shù)（個(gè)）	＞500	367	248	26	15

（4）實(shí)驗(yàn)分離得到的能夠分解尿素的細(xì)菌需要臨時(shí)保藏，需將其接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)基上，將試管放入4℃℃的冰箱中保藏．

Answer 1

分析 本題是考查土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的知識(shí)，篩選尿素分解菌需要使用尿素為唯一的氮源的選擇培養(yǎng)基，尿素分解菌可以使用酚紅指示劑進(jìn)行鑒定．稀釋涂布平板法接種可以用來(lái)進(jìn)行微生物的計(jì)數(shù)．根據(jù)問(wèn)題涉及的具體內(nèi)容梳理相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，然后分析解答．

解答 解：（1）分離出土壤中分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該用尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，尿素分解菌可以用酚紅指示劑進(jìn)行鑒定．
（2）若取土樣5g，應(yīng)加入45ml的無(wú)菌水配制成稀釋10倍土壤溶液，樣品的稀釋程度直接影響平板上生長(zhǎng)的菌落的數(shù)目，選用一定稀釋范圍的樣品進(jìn)行培養(yǎng)，取樣稀釋前，一定要將菌液搖勻以減少誤差；將10³-10⁷倍的稀釋液分別吸取0.1mL加入到固體培養(yǎng)基上，用稀釋涂布平板法將菌液用涂布器涂布到固體培養(yǎng)基上．
（3）將接種的培養(yǎng)皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h，觀察并統(tǒng)計(jì)具有紅色環(huán)帶的菌落既是分解尿素的菌的菌落，估算樣品中的活菌數(shù)時(shí)，往往選取菌落數(shù)在30 到300之間的平板，分析表格是數(shù)據(jù)可知，10⁵的稀釋度平板菌落數(shù)在這一范圍．每克土壤中的菌落數(shù)為248×10×10⁵÷5=4.96×10⁷．稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，測(cè)定的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低．
（4）菌種的臨時(shí)保藏需要用將其接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)基上，將試管放入4℃的冰箱中保藏．
故答案為：
（1）尿素作為唯一的氮源   選擇培養(yǎng)基   酚紅
（2）45   稀釋涂布平板法
（3）10⁵ 4.96×10⁷低
（4）固體斜面培養(yǎng)基   4℃

點(diǎn)評(píng) 本題是知識(shí)點(diǎn)是分解尿素的菌的代謝類型，分解尿素的菌的分離應(yīng)該選用的培養(yǎng)基，稀釋涂布平板法的操作過(guò)程，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)的平板要求，主要考查學(xué)生對(duì)分解尿素的菌的分離和計(jì)數(shù)的知識(shí)的掌握和運(yùn)用．