Question

1．回答有關基因工程的問題：
（1）構建基因工程表達載體時，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產生黏性末端，也可能產生平末端．若要在限制酶切割目的基因和質粒后使其直接進行連接，則應選擇能使二者產生相同（相同、不同）的黏性末端．
（2）利用大腸桿菌生產人胰島素時，構建的表達載體含有人胰島素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是RNA聚合酶識別和結合的部位．在用表達載體轉化大腸桿菌時，常用Ca²⁺處理大腸桿菌，以利于表達載體進入；為了檢測胰島素基因是否轉錄出了mRNA，可用標記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術稱為分子雜交技術．為了檢測胰島素基因轉錄的mRNA是否翻譯成蛋白質，常用抗原-抗體雜交技術．
（3）如果要將某目的基因通過農桿菌轉化法導入植物細胞，先要將目的基因插入農桿菌Ti質粒的T-DNA中，然后用該農桿菌感染植物細胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細胞的染色體DNA上．

Answer 1

分析 1、基因表達載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因．
2、啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結合的DNA序列，是基因的一個組成部分，控制基因表達（轉錄）的起始時間和表達的程度．終止子是給予RNA聚合酶轉錄終止信號的DNA序列．
3、目的基因分子水平上的檢測：
①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；
②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；
③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．

解答 解：（1）限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端和平末端兩種．若要在限制酶切割目的基因和質粒后使其直接進行連接，則應選擇能使二者產生相同的黏性末端．
（2）啟動子是RNA聚合酶識別和結合的位點，有了它才能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質．在用表達載體轉化大腸桿菌時，常用Ca²⁺處理大腸桿菌，使大腸桿菌變成感受態(tài)細胞，以利于表達載體進入；為了檢測胰島素基因是否轉錄出了mRNA，可用采用分子雜交技術，即用標記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交．為了檢測胰島素基因轉錄的mRNA是否翻譯成胰島素，常用抗原-抗體雜交技術．
（3）如果要將某目的基因通過農桿菌轉化法導入植物細胞，先要將目的基因插入農桿菌Ti質粒的T-DNA中，然后用該農桿菌感染植物細胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細胞的染色體的DNA上．
故答案為：
（1）平    相同
（2）RNA聚合酶識別和結合的部位  Ca²⁺     分子雜交技術    蛋白質
（3）T-DNA  染色體DNA

點評 本題考查了基因工程的相關知識，要求考生能夠識記限制酶的作用特點和作用結果；識記啟動子的功能；識記目的基因分子水平上檢測的方法；識記農桿菌轉化法的相關過程等，難度適中，屬于考綱中識記、理解層次的考查．