Question

15．草甘膦是一種非選擇性、無(wú)殘留滅生性除草劑．科學(xué)家從土壤農(nóng)桿菌變種CP4中分離到抗草甘膦酶的基因，并轉(zhuǎn)移到無(wú)抗草甘膦的大豆中，從而得到新的大豆品種．請(qǐng)回答：
（1）在構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí)，需用同種限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)含編碼抗草甘膦酶基因的DNA和運(yùn)載體進(jìn)行酶切．
（2）基因表達(dá)載體除了帶有抗草甘膦酶的基因以外，還必須含有啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）請(qǐng)寫出兩種檢測(cè)目的基因是否表達(dá)的方法：抗原-抗體雜交法和噴施草甘膦溶液．
（4）在檢測(cè)進(jìn)口大豆是否為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品時(shí)，可用核酸探針進(jìn)行檢測(cè)．核酸探針可以用PCR技術(shù)進(jìn)行基因克隆，此克隆過(guò)程是利用DNA復(fù)制的原理，利用該技術(shù)的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，需加入的酶是耐高溫的DNA聚合（Taq）酶．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA．
（2）基因表達(dá)載體的組成包括目的基因（抗草甘膦酶的基因）、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）檢測(cè)目的基因是否表達(dá)的方法：從分子水平上檢測(cè)，可采用抗原-抗體雜交法；從個(gè)體水平上鑒定，可噴施草甘膦溶液，觀察大豆的生存情況．
（4）基因克隆屬于分子水平的克隆，可采用PCR技術(shù)，其原理是DNA復(fù)制；采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列；PCR技術(shù)中有高溫變性過(guò)程，因此需加入的酶是耐高溫的DNA聚合（Taq）酶．
故答案為：
（1）限制性核酸內(nèi)切      
（2）標(biāo)記基因       
（3）抗原-抗體雜交法     噴施草甘膦溶液
（4）PCR     DNA復(fù)制    要有一段已知目的基因的核苷酸序列     耐高溫的DNA聚合（Taq）酶

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識(shí)記PCR技術(shù)的概念、原理、條件及過(guò)程，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．