12.現(xiàn)有甲、乙兩種可能有一定致畸、致癌作用的化學(xué)物質(zhì),利用動物細(xì)胞培養(yǎng)的方法能夠鑒定它們是否有毒性,并比較二者毒性的強弱:請完成下列實驗報告.
I.實驗材料:小白鼠胚胎.
Ⅱ.藥品用具:胰蛋白酶液、動物細(xì)胞培養(yǎng)液、動物細(xì)胞固定液、適宜濃度的龍膽紫溶液、滴管、培養(yǎng)皿、剪刀、錐形瓶、細(xì)胞培養(yǎng)箱、載玻片、蓋玻片、光學(xué)顯微鏡、小白鼠正常體細(xì)胞有絲分裂高倍顯微鏡照片.
Ⅲ.實驗原理:將有毒物質(zhì)加入細(xì)胞培養(yǎng)液后,培養(yǎng)的動物細(xì)胞會發(fā)生染色體數(shù)量和結(jié)構(gòu)變異(答出有毒物質(zhì)使細(xì)胞發(fā)生變異),根據(jù)這些變異細(xì)胞占全部培養(yǎng)細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)(以下稱Q值),可判斷該化學(xué)物質(zhì)的毒性.
Ⅳ.實驗步驟:
(1)制備細(xì)胞懸液:把小白鼠胚胎放在培養(yǎng)皿中剪碎,轉(zhuǎn)入錐形瓶中,加人胰蛋白酶液處理,使胚胎組織離散成單個細(xì)胞,再加入動物細(xì)胞培養(yǎng)液,制成細(xì)胞懸液.
(2)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng):
①取A、B、C三個潔凈的培養(yǎng)瓶,分別加入等量的細(xì)胞懸液.
②向A、B兩個培養(yǎng)瓶中分別加入等量的化學(xué)物質(zhì)甲、乙,并將培養(yǎng)瓶搖勻;C瓶不作處理,作為對照.
③把3個培養(yǎng)瓶放在37℃(或適宜溫度)的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng).
(3)制作臨時裝片:
①當(dāng)細(xì)胞繁殖到大約第8代左右時,同時從細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出三個培養(yǎng)瓶,用胰蛋白酶液處理,使培養(yǎng)的細(xì)胞從瓶壁上脫落,再加入動物細(xì)胞固定液迅速殺死細(xì)胞,將細(xì)胞固定在不同的分裂時期.
②靜置一段時間后,分別從各培養(yǎng)瓶底部吸取適量的細(xì)胞懸液.滴在與培養(yǎng)瓶有相同編號的載玻片中央,加1-2滴一定濃度的龍膽紫溶液染色,3-5min后,蓋上蓋玻片,制成臨時裝片.
(4)鏡檢和統(tǒng)計:把臨時裝片放在顯微鏡下,尋找處于有絲分裂中期的細(xì)胞,并與小白鼠正常體細(xì)胞有絲分裂高倍顯微鏡照片對比以確認(rèn)發(fā)生上述變異的細(xì)胞,同時統(tǒng)計該期變異的細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)(Q值).
V.實驗結(jié)果:
培養(yǎng)瓶 | A | B | C |
Q值 | 1.3% | 12.5% | 0.1% |
Ⅵ.實驗結(jié)論:甲、乙兩種化學(xué)物質(zhì)均有一定毒性,且乙的毒性比甲的毒性大.