Question

6．利用基因工程培育抗病香蕉的流程如下：

回答下列問題：
（1）獲得抗病基因后，常利用PCR技術進行擴增，利用該技術擴增的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據這一序列合成引物．該技術的完成需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶．
（2）使用農桿菌將抗病基因導入香蕉細胞中，農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可將抗病基因轉移至香蕉細胞染色體DNA上．
（3）卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長．欲利用添加了卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導入抗病基因的香蕉細胞，則基因表達載體A的構建時應含有卡那霉素抗性基因，以作為標記基因．
（4）抗病基因進入香蕉細胞內，并在香蕉細胞內維持穩(wěn)定和表達，該過程稱為轉化．
（5）欲檢測抗病基因是否表達出蛋白質，可從轉基因抗病香蕉中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原-抗體雜交予以檢測．

Answer 1

分析 1、PCR技術：
（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術．
（2）原理：DNA復制．
（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物．
（4）過程：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復性：引物結合到互補鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈．PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開．
2、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）獲得抗病基因后，常利用PCR技術進行擴增．利用該技術擴增的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據這一序列合成引物．該技術的完成需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶．
（2）根據受體細胞不同，將目的基因導入受體細胞的方法也不一樣．使用農桿菌將抗病基因導入香蕉細胞中，農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可將抗病基因轉移至香蕉細胞染色體DNA上．
（3）欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導入抗病基因的香蕉細胞，重組質粒中應同時含有卡那霉素抗性基因，作為標記基因．
（4）抗病基因進入香蕉細胞內，并在香蕉細胞內維持穩(wěn)定和表達，該過程稱為轉化．
（5）欲檢測抗病基因是否表達出蛋白質，可從轉基因抗病香蕉中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原-抗體雜交予以檢測．
故答案為：
（1）PCR   引物   熱穩(wěn)定DNA聚合
（2）T-DNA   染色體DNA
（3）卡那霉素抗性基因
（4）轉化
（5）相應的抗體進行抗原-抗體雜交

點評 本題結合轉基因抗病香蕉的培育過程圖，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)技術的相關知識，意在考查考生的識圖能力和理解所學知識要點的能力；能運用所學知識與觀點，對某些生物學問題進行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結論．