Question

2．科學(xué)家利用基因工程技術(shù)將魚(yú)的抗凍蛋白基因?qū)�入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高．在培育轉(zhuǎn)基因番茄的過(guò)程中，下列操作不合理的是（　�。�

• A． 可用PCR技術(shù)或逆轉(zhuǎn)錄法獲得抗凍蛋白基因
• B． 將抗凍蛋白基因與相應(yīng)載體連接構(gòu)建基因表達(dá)載體
• C． 利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將基因表達(dá)載體導(dǎo)入番茄體細(xì)胞
• D． 在低溫條件下篩選已導(dǎo)入抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：A、獲取目的基因的方法包括：從基因文庫(kù)中獲取、采用PCR技術(shù)體外擴(kuò)增、人工化學(xué)合成（如逆轉(zhuǎn)錄法），A正確；
B、在培育轉(zhuǎn)基因番茄的過(guò)程中，需要將抗凍蛋白基因與相應(yīng)載體連接構(gòu)建基因表達(dá)載體，再導(dǎo)入受體細(xì)胞，B正確；
C、將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞最常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，C正確；
D、利用標(biāo)記基因來(lái)自篩選已導(dǎo)入抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，由于該基因在受體番茄細(xì)胞中還沒(méi)有表達(dá)，因此不能在低溫條件下篩選已導(dǎo)入抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，D錯(cuò)誤．
故選：D．

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．