Question

為了提高乙肝疫苗的預(yù)防效果，科學(xué)家們對于該疫苗的研發(fā)過程做如下的改進：提取乙肝病毒（HBV）基因重組后，與β-半乳糖苷酶基因結(jié)合，形成重組質(zhì)粒BPT（如圖1），隨后的操作如圖2，請回答下列問題：

（1）在圖一中

 

（A/B）插入終止子．構(gòu)建重組質(zhì)粒BPT必須使用

 

作為工具酶．
（2）從大腸桿菌中提取融合蛋白P-BPT仍需進一步修飾、純化．其主要原因是因為大腸桿菌不具備

 

（細(xì)胞器）．
（3）實驗中抽取小鼠脾的淋巴細(xì)胞進行細(xì)胞培養(yǎng)，在培養(yǎng)基中需要添加

 

防止雜菌生長．從分子水平上使用

 

對特異性免疫應(yīng)答結(jié)果進行檢測．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
目的基因的檢測與鑒定：探針--用放射性同位素（或熒光分子）標(biāo)記的含有目的基因DNA片段．
1．分子水平上的檢測：
①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)
②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)
③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)
2．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
（例：用蟲食用棉花，觀察其存活情況，來鑒定棉花是否具有抗蟲特性．）
真核細(xì)胞中，分泌蛋白的合成與分泌過程：核糖體合成蛋白質(zhì)→內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進行粗加工→高爾基體進行再加工→細(xì)胞膜，整個過程還需要線粒體提供能量．

解答： 解：（1）根據(jù)題意可知，提取乙肝病毒（HBV）基因重組后，與β-半乳糖苷酶基因結(jié)合，啟動子在組合基因的首端，終止子在組合基因的末端，從而終止基因的轉(zhuǎn)錄．構(gòu)建基因表達載體的工具酶包括限制酶和DNA連接酶．
（2）真核細(xì)胞中，分泌蛋白的合成與分泌過程：核糖體合成蛋白質(zhì)→內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進行粗加工→高爾基體進行再加工→細(xì)胞膜，而原核細(xì)胞中只有核糖體一種細(xì)胞器，即大腸桿菌中沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，不能對該蛋白質(zhì)進一步修飾、純化．
（3）在動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，需要在培養(yǎng)基中添加抗生素，以抑制雜菌的生長．從分子水平上使用抗原-抗體雜交對特異性免疫應(yīng)答結(jié)果進行檢測．
故答案為：
（1）B    限制酶，DNA連接酶
（2）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體
（3）抗生素     抗原-抗體雜交

點評：本題考查基因工程和細(xì)胞工程的有關(guān)知識，要求考生能夠識記基因工程的工具酶；理解基因表達載體中啟動子和終止子的功能；識記原核細(xì)胞和真核細(xì)胞結(jié)構(gòu)的異同點，掌握與分泌蛋白形成有關(guān)的細(xì)胞器等，再結(jié)合所學(xué)知識準(zhǔn)確答題．