Question

16．如圖為培育轉(zhuǎn)基因小鼠的部分過(guò)程示意圖．請(qǐng)回答下列問(wèn)題．

（1）獲取目的基因是實(shí)施基因工程的第一步．
（2）圖中的A細(xì)胞通常為受精卵細(xì)胞，將外源基因?qū)�入該�?xì)胞常用的方法是顯微注射法．
（3）仔鼠出生后可用其尾巴進(jìn)行DNA檢測(cè)，通過(guò)DNA分子雜交方法，檢測(cè)出攜帶外源基因的小鼠．至于外源基因是否合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)，可從轉(zhuǎn)基因小鼠中提取蛋白質(zhì)，并用相應(yīng)的（單克�。┛贵w與提取的蛋白質(zhì)者進(jìn)行雜交，若能雜交，則表明小鼠體內(nèi)的外源基因已表達(dá)．
（4）在外源基因?qū)�入小鼠的A細(xì)胞時(shí)，外源基因可能隨機(jī)地插入到該細(xì)胞的DNA中．這些細(xì)胞有的能發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小鼠，有的卻死亡．請(qǐng)分析外源基因插入后導(dǎo)致有些A細(xì)胞死亡的最可能原因外源基因的插入使受精卵內(nèi)生命活動(dòng)必需的某些基因不能正常表達(dá)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲��；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)．
（2）培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物常以受精卵作為受體細(xì)胞，因?yàn)槭芫�卵的全能性最高；將目的基因�(qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法．
（3）檢測(cè)外源基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞用DNA分子雜交技術(shù)；檢測(cè)是否成功表達(dá)蛋白質(zhì)采用抗原-抗體雜交技術(shù)，即從轉(zhuǎn)基因小鼠中提取蛋白質(zhì)，并用相應(yīng)的（單克隆）抗體與提取的蛋白質(zhì)者進(jìn)行雜交，若能雜交，則表明小鼠體內(nèi)的外源基因已表達(dá)．
（4）外源基因的插入使受精卵內(nèi)生命活動(dòng)必需的某些基因不能正常表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞死亡．
故答案為：
（1）獲取目的基因
（2）受精卵　顯微注射法
（3）DNA分子雜交�。▎慰寺。┛贵w　已表達(dá)
（4）外源基因的插入使受精卵內(nèi)生命活動(dòng)必需的某些基因不能正常表達(dá)

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的概念、原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．