Question

6．某實(shí)驗(yàn)小組對(duì)酸奶中乳酸菌的數(shù)量進(jìn)行了測(cè)定，取6支滅菌的試管，分別加入9mL滅菌的生理鹽水，標(biāo)號(hào)A₁、A₂、A₃、A₄、A₅、A₆，吸取1mL酸奶樣液中加入試管A₁中，然后另取一支吸管從A₂中吸取1mL溶液，加入A₂中，依此類推，最后從試管A₆中取0.1mL樣液進(jìn)行涂布計(jì)數(shù)，涂布三個(gè)平板，其菌落數(shù)分別為251、265、276個(gè)．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）培養(yǎng)乳酸菌除了必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或微堿性．
（2）制備乳酸菌的培養(yǎng)基過(guò)程中，對(duì)培養(yǎng)皿滅菌的常用方法是干熱滅菌法．倒平板時(shí)培養(yǎng)基的溫度不能太低，原因是溫度太低會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固，無(wú)法鋪展均勻；待平板冷凝后，要將平板倒置，其目的是防止平板冷凝后，培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基中造成污染．
（3）該實(shí)驗(yàn)小組對(duì)乳酸菌接種所采用的方法是稀釋涂布平板法．根據(jù)三個(gè)平板中菌落數(shù)，可推測(cè)原酸奶中乳酸菌的濃度為2.64×10⁹個(gè)/mL，該方法測(cè)定的乳酸菌的含量和實(shí)際值相比，一般偏小（填“偏大”或“偏小”）．
（4）為了使測(cè)量結(jié)果更加準(zhǔn)確，該實(shí)驗(yàn)對(duì)照組的設(shè)置是另增設(shè)一組培養(yǎng)基，接種等量滅菌的生理鹽水．

Answer 1

分析 1、配制乳酸菌分離培養(yǎng)基：制備該培養(yǎng)基的步驟是：計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板．該培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽四類營(yíng)養(yǎng)成分，在培養(yǎng)該細(xì)菌的培養(yǎng)基中還需要添加維生素．培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法．
2、分離微生物常用的方法：
①平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面． 
②稀釋涂布平板法：將駿業(yè)進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)．
其中，稀釋涂布平板法還可以用于對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)．

解答 解：（1）乳酸菌是一種細(xì)菌，制備細(xì)菌培養(yǎng)基時(shí)，需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或微堿性．
（2）制備培養(yǎng)基過(guò)程中，對(duì)培養(yǎng)皿滅菌的常用方法是干熱滅菌法．溫度太低會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固，無(wú)法鋪展均勻，因此倒平板時(shí)培養(yǎng)基的溫度不能太低；待平板冷凝后，要將平板倒置，其目的是防止平板冷凝后，培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基中造成污染．
（3）取6支滅菌的試管，分別加入9mL滅菌的生理鹽水，標(biāo)號(hào)A₁、A₂、A₃、A₄、A₅、A₆，吸取1mL酸奶樣液中加入試管A₁中，然后另取一支吸管從A₂中吸取1mL溶液，加入A₂中，依此類推，最后從試管A₆中取0.1mL樣液進(jìn)行涂布計(jì)數(shù)，這種接種方法是稀釋涂布法．根據(jù)操作步驟可推知得到10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶倍的稀釋液．從試管A₆中取0.1mL樣液進(jìn)行涂布計(jì)數(shù)，三個(gè)平板中菌落數(shù)分別為251、265、276個(gè)，可推測(cè)原酸奶中乳酸菌的濃度為$\frac{251+265+276}{3}×10×1{0}^{6}$=2.64×10⁹個(gè)/mL．稀釋涂布平板法測(cè)定活菌數(shù)目時(shí)，由于相鄰的細(xì)菌可能形成一個(gè)菌落，因此測(cè)定值可能比實(shí)際值小．
（4）為了使測(cè)量結(jié)果更加準(zhǔn)確，需要另增設(shè)一組培養(yǎng)基，接種等量滅菌的生理鹽水．
故答案為：
（1）中性或微堿性
（2）干熱滅菌法       溫度太低會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固，無(wú)法鋪展均勻       防止平板冷凝后，培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基中造成污染
（3）稀釋涂布平板法      2.64×10⁹     偏小
（4）另增設(shè)一組培養(yǎng)基，接種等量滅菌的生理鹽水

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)等知識(shí)，要求考生識(shí)記微生物分離和培養(yǎng)的過(guò)程，采用的接種方法等，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．