Question

一種廣泛使用的除草劑（含氮有機物）在土壤中不易被降解，長期使用可污染土壤．為修復被該除草劑污染的土壤，可按圖甲程序選育能降解該除草劑的細菌（已知該除草劑在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明）．

（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理．現(xiàn)有一升土壤浸出液，用無菌吸管吸取1mL液樣至盛有9mL無菌水的試管中，依次稀釋10³稀釋度．各取0.1mL已稀釋10 ³倍的水樣分別接種到三個培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記錄的菌落數(shù)分別為55、56、57，則每升原土壤浸出液樣中菌體數(shù)為

 

．
（2）要從長期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，從用途方面來看，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點是

 

．
（3）接種技術(shù)的核心是

 

．在劃線接種時，連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步

 

，培養(yǎng)時，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長的主要原因是

 

或有氧條件抑制了這些細菌的生長．
（4）在培養(yǎng)基上形成的菌落中，無透明帶菌落利用的氮源主要是

 

，有透明帶菌落利用的氮源主要是

 

，據(jù)此可篩選出目的菌．實驗結(jié)果如圖乙顯示的A～E五種菌株中，

 

是最理想菌株．
（5）科研人員用放射線處理該細菌獲得兩個突變株A和B，然后對突變株A和B進行實驗，結(jié)果如下表所示：

接種的菌種	一般培養(yǎng)基	實驗處理及結(jié)果
A	不生長	添加營養(yǎng)物質(zhì)甲，能生長
B	不生長	添加營養(yǎng)物質(zhì)乙，能生長
A+B	能生長	不添加營養(yǎng)物質(zhì)甲、乙就能生長

突變株A不能在一般培養(yǎng)基上生長的原因是

 

．突變株A和B混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長的最可能原因是

 

．

Answer 1

考點：測定某種微生物的數(shù)量,微生物的分離和培養(yǎng),培養(yǎng)基對微生物的選擇作用

專題：

分析：1、選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì)，以抑制不需要的不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物生長，本題這種根據(jù)流程圖看，“無氮培養(yǎng)基+高濃度的除草劑”，說明A、B、C培養(yǎng)基中是以除草劑為唯一氮源．
2、每克樣品中的菌落數(shù)=（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下的平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL）M代表稀釋的倍數(shù)．

解答： 解：（1）圖中稀釋的倍數(shù)是10⁸，三個菌落的平均數(shù)=（55+56+57）÷3=56，則每毫升樣品中菌株數(shù)=56÷1×10⁸=5.6×10⁹個，所以每升土壤浸出液中的菌株數(shù)=5.6×10⁹×10³=5.6×10¹²個．
（2）該除草劑為含氮有機物，為了選育能降解該除草劑的細菌，應采用唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，即無氮的固體培養(yǎng)基中添加該除草劑．
（3）接種技術(shù)的核心是無菌操作，防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度．在劃線接種時，連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋獲得單個菌落，培養(yǎng)時，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長，原因是培養(yǎng)基缺少這些細菌可利用的氮源．
（4）由于該除草劑的培養(yǎng)基不透明，被菌落分解后可產(chǎn)生透明帶，無透明帶說明除草劑未被分解，菌落利用的氮源就只能是空氣中的氮氣了；而出現(xiàn)透明帶說明除草劑被分解，菌落是分解該除草劑的細菌，氮源是該除草劑；E透明圈最大，故是最理想菌株．
（5）根據(jù)題意突變株A在普通培養(yǎng)基中不生長，加營養(yǎng)物質(zhì)甲可以生長，說明突變株A不能合成突變株A必需的營養(yǎng)物質(zhì)甲，同理突變株B不能合成突變株B必需的營養(yǎng)物質(zhì)乙，生物體內(nèi)的生化反應都需要酶的參與，不能反應就說明缺少相應的酶；而將A+B就可以生長，說明A可以提供B所必需的營養(yǎng)物質(zhì)乙，B可以提供A所必需的營養(yǎng)物質(zhì)甲．
故答案為：
（1）5.6×10¹²
（2）在無氮的培養(yǎng)基中添加該除草劑
（3）防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度   稀釋獲得單個菌落   培養(yǎng)基缺少這些細菌可利用的氮源 
（4）氮氣    該除草劑   E
（5）突變株A缺乏合成營養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶   突變株A生長需要的營養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B可以提供；突變株B生長需要的營養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株A可以提供

點評：本題的知識點是微生物培養(yǎng)，篩選微生物的方法、微生物的數(shù)目的測定等方法，主要考查學生運用微生物的培養(yǎng)技術(shù)解決生活中問題的能力和對微生物，是實驗室培養(yǎng)技術(shù)的綜合應用能力．