Question

一種廣泛使用的除草劑（含氮有機(jī)物）在土壤中不易被降解，長(zhǎng)期使用可污染土壤．為修復(fù)被該除草劑污染的土壤，可按圖甲程序選育能降解該除草劑的細(xì)菌（已知該除草劑在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明）．

（1）制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度過(guò)高，需將浸出液進(jìn)行稀釋處理．現(xiàn)有一升土壤浸出液，用無(wú)菌吸管吸取1mL液樣至盛有9mL無(wú)菌水的試管中，依次稀釋10³稀釋度．各取0.1mL已稀釋10 ³倍的水樣分別接種到三個(gè)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記錄的菌落數(shù)分別為55、56、57，則每升原土壤浸出液樣中菌體數(shù)為

 

．
（2）要從長(zhǎng)期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，從用途方面來(lái)看，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點(diǎn)是

 

．
（3）接種技術(shù)的核心是

 

．在劃線接種時(shí)，連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步

 

，培養(yǎng)時(shí)，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的主要原因是

 

或有氧條件抑制了這些細(xì)菌的生長(zhǎng)．
（4）在培養(yǎng)基上形成的菌落中，無(wú)透明帶菌落利用的氮源主要是

 

，有透明帶菌落利用的氮源主要是

 

，據(jù)此可篩選出目的菌．實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖乙顯示的A～E五種菌株中，

 

是最理想菌株．
（5）科研人員用放射線處理該細(xì)菌獲得兩個(gè)突變株A和B，然后對(duì)突變株A和B進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下表所示：

接種的菌種	一般培養(yǎng)基	實(shí)驗(yàn)處理及結(jié)果
A	不生長(zhǎng)	添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲，能生長(zhǎng)
B	不生長(zhǎng)	添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙，能生長(zhǎng)
A+B	能生長(zhǎng)	不添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲、乙就能生長(zhǎng)

突變株A不能在一般培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的原因是

 

．突變株A和B混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)的最可能原因是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：測(cè)定某種微生物的數(shù)量,微生物的分離和培養(yǎng),培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用

專題：

分析：1、選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物生長(zhǎng)，本題這種根據(jù)流程圖看，“無(wú)氮培養(yǎng)基+高濃度的除草劑”，說(shuō)明A、B、C培養(yǎng)基中是以除草劑為唯一氮源．
2、每克樣品中的菌落數(shù)=（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下的平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL）M代表稀釋的倍數(shù)．

解答： 解：（1）圖中稀釋的倍數(shù)是10⁸，三個(gè)菌落的平均數(shù)=（55+56+57）÷3=56，則每毫升樣品中菌株數(shù)=56÷1×10⁸=5.6×10⁹個(gè)，所以每升土壤浸出液中的菌株數(shù)=5.6×10⁹×10³=5.6×10¹²個(gè)．
（2）該除草劑為含氮有機(jī)物，為了選育能降解該除草劑的細(xì)菌，應(yīng)采用唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，即無(wú)氮的固體培養(yǎng)基中添加該除草劑．
（3）接種技術(shù)的核心是無(wú)菌操作，防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度．在劃線接種時(shí)，連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋獲得單個(gè)菌落，培養(yǎng)時(shí)，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，原因是培養(yǎng)基缺少這些細(xì)菌可利用的氮源．
（4）由于該除草劑的培養(yǎng)基不透明，被菌落分解后可產(chǎn)生透明帶，無(wú)透明帶說(shuō)明除草劑未被分解，菌落利用的氮源就只能是空氣中的氮?dú)饬�；而出現(xiàn)透明帶說(shuō)明除草劑被分解，菌落是分解該除草劑的細(xì)菌，氮源是該除草劑；E透明圈最大，故是最理想菌株．
（5）根據(jù)題意突變株A在普通培養(yǎng)基中不生長(zhǎng)，加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲可以生長(zhǎng)，說(shuō)明突變株A不能合成突變株A必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲，同理突變株B不能合成突變株B必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙，生物體內(nèi)的生化反應(yīng)都需要酶的參與，不能反應(yīng)就說(shuō)明缺少相應(yīng)的酶；而將A+B就可以生長(zhǎng)，說(shuō)明A可以提供B所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙，B可以提供A所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲．
故答案為：
（1）5.6×10¹²
（2）在無(wú)氮的培養(yǎng)基中添加該除草劑
（3）防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度   稀釋獲得單個(gè)菌落   培養(yǎng)基缺少這些細(xì)菌可利用的氮源 
（4）氮?dú)?nbsp;   該除草劑   E
（5）突變株A缺乏合成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶   突變株A生長(zhǎng)需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B可以提供；突變株B生長(zhǎng)需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株A可以提供

點(diǎn)評(píng)：本題的知識(shí)點(diǎn)是微生物培養(yǎng)，篩選微生物的方法、微生物的數(shù)目的測(cè)定等方法，主要考查學(xué)生運(yùn)用微生物的培養(yǎng)技術(shù)解決生活中問(wèn)題的能力和對(duì)微生物，是實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)技術(shù)的綜合應(yīng)用能力．