Question

3．科學家將擬南芥的抗寒基因（CBFl），轉(zhuǎn)入香蕉以獲得抗寒的香蕉品種．如圖是某質(zhì)粒載體上的Aac I、Xba I、EcoR I、Hind III四種限制酶的切割位點示意圖．
據(jù)圖回答問題：
（1）在該實驗中為構(gòu)建基因表達載體，用Sac I、Xba I切下CBFl基因后，對質(zhì)粒載體進行切割的限制酶是SacI、XbaI，理由是用相同限制酶切割來源不同的DNA后，可產(chǎn)生相同的末端．
（2）連接CBFl基因到該質(zhì)粒載體后，作為基因表達載體的組成還必須有啟動子和終止子．將重組質(zhì)粒導入香蕉細胞最用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）為了鑒別受體細胞中是否含有CBFl基因，可用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行篩選．
（4）科學家將生長健壯、苗齡一次的轉(zhuǎn)基因香蕉（實驗組）與非轉(zhuǎn)基因香蕉（對照組）進行低溫處理，鑒定兩組之間的抗寒性差異，如果實驗組的抗寒能力明顯高于對照組，則說明獲得了抗寒的香蕉優(yōu)質(zhì)品種．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）構(gòu)建基因表達載體時，應該用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運載體，因此為構(gòu)建基因表達載體，用Sac I、Xba I切下CBFl基因后，對質(zhì)粒載體進行切割的限制酶也是Sac I、Xba I，這樣可以產(chǎn)生相應的黏性末端，便于DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA．
（2）因表達載體的組成包括啟動子、終止子、目的基因、標記基因等；將目的基因?qū)�入植物細胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）根據(jù)運載體上的標記基因（氨芐青霉素抗性基因）可知，鑒別受體細胞中是否含有CBFl基因可用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行篩選．
（4）轉(zhuǎn)基因香蕉能抗寒，因此將生長健壯、苗齡一次的轉(zhuǎn)基因香蕉（實驗組）與非轉(zhuǎn)基因香蕉（對照組）進行低溫處理，鑒定兩組之間的抗寒性差異，如果實驗組的抗寒能力明顯高于對照組，則說明獲得了抗寒的香蕉優(yōu)質(zhì)品種．
故答案為：
（1）Sac I、Xba I     用相同限制酶切割來源不同的DNA后，可產(chǎn)生相同的末端
（2）啟動子和終止子    農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（3）氨芐青霉素
（4）低溫     實驗組的抗寒能力明顯高于對照組

點評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、概念、操作步驟等，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結(jié)合所學的知識準確答題．